第六篇微生物发酵机理2.pptVIP

* * 第四节　代谢调节的人工控制 　　微生物的正常代谢不会使代谢产物过量积累，发酵目的是尽可能多地积累代谢产物，以此必须打破微生物的代谢调节机制，使代谢产物大量积累。 方法 改变微生物的遗传学特性 控制发酵条件 一　改变微生物的遗传学特性 （一）.营养缺陷型和渗透缺陷型突变菌株的应用 1.营养缺陷型：原菌株由于发生突变，致使代谢途径中某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某种物质的能力，必须在培养基中外源补加该营养物质才能正常生长的突变菌株。 在培养过程中我们可以控制补加营养物质的量也不造成反馈调节（阻遏或抑制）。 如 A B C D E 限量添加E，就会造成C大量积累 枯草芽孢杆菌的精氨酸营养缺陷型，鸟氨酸积累量可到到25g/L. A B C F D G E A B C F D G E 协同反馈 A B C F D G E A B C F D G E H 赖氨酸简介： 谷物中不含的必须氨基酸。 天冬氨酸 天冬氨酰磷酸 天冬氨酸半醛 赖氨酸 高丝氨酸 甲硫氨酸 苏氨酸 异亮氨酸 天冬氨酸激酶（AK) 反馈抑制 反馈阻遏 谷氨酸棒状杆菌生产赖氨酸 高丝氨酸脱氢酶(HSDH) 利用谷氨酸棒状生产赖氨酸比利用大肠杆菌的优势： （1）　不存在天冬氨酸激酶或天冬氨酸半醛脱氢酶受阻遏的问题； （2）　赖氨酸分支的第一和第二个酶（双氢吡啶二羧酸合成酶和双氢吡啶二羧酸还原酶）不受赖氨酸的抑制或阻遏； （3）赖氨酸产生菌中缺少L-赖氨酸脱羧酶。 肌苷酸生成菌株 PRPP－磷酸核糖基焦磷酸 IMP－肌苷酸 S-AMP－肌苷酸琥珀酸 AMP－腺嘌呤5`－单磷酸 XMP－黄苷酸 GMP－鸟嘌呤5`－单磷酸 PRPP IMP S-AMP AMP XMP GMP PRPP酰氨转移酶 抑制 IMP脱氢酶 S-AMP合成酶 肌苷酸简介：很好的高效调味品，也是重要的工业原料。 产量达13g/L 2. 渗漏缺陷型(leaky mutant): 一种不完全遗传障碍营养缺陷型，能够自己合成某一代谢终产物但达不到反馈调节的浓度，所以不会造成反馈抑制而影响中间代谢产物的积累。 与营养缺陷型的区别？ （二）抗反馈调节突变菌株的应用 抗反馈调节菌株：对反馈抑制作用不敏感，或对反馈阻遏有抗性，或二者兼而有之的菌株。 抗反馈抑制突变菌株的获得途径： 1.结构类似物抗性突变菌株 2.营养缺陷型回复突变菌株 获得方法及其原理： 结构类似物抗性突变菌株 将接除了反馈抑制的突变菌株筛选出来 A—某种氨基酸 A`—某种氨基酸的类似物 A` 经过突变处理的菌株 极少数 大多数 对氟苯丙氨酸 苯丙氨酸 D-精氨酸 精氨酸 乙硫氨酸 异亮氨酸 ?-氨基-?-羟基戊酸（AHV) 苏氨酸 S-（2氨基乙基）-L半胱氨酸-(AEC) 赖氨酸 结构类似物 目标产物 营养缺陷型回复突变菌株 获得方法及其原理： 营养缺陷型 出发菌株 催化亚基基因突变 催化和调节亚基均突变 催化亚基回复 催化亚基和调节回复 催化亚基完全回复 催化亚基未完全回复 抗反馈调节突变菌株与营养突变菌株比较： 1.不受培养基中营养成分的限制，生产稳定； 2. 易于筛选 3.可有效防止回复突变，易于保存 对于分支合成途径使用抗性突变菌株要和营养缺陷型结合育种，才会得到更高的产量。 葡萄糖 天冬氨酸 天冬氨酸磷酸 高丝氨酸 苏氨酸 AHVr 甲硫氨酸 Met - 赖氨酸 Lys- HD AK 反馈抑制 反馈阻遏 黄色短杆菌 的苏氨酸合 成途径 抗代谢类似物的筛选方法 不含结构类似物 含结构类似物 3.抗分解阻遏突变体的应用 例如：葡萄糖－脯氨酸，筛选抗分解阻遏突变体 利用葡萄糖类似物选育蔗糖酶、淀粉酶、纤维素酶 4.选育组成型突变株和超产突变株 如果调节基因发生突变，以至产生无效的阻遏物而不能和操纵基因结合，或操纵基因突变，从而造成结构基因不受控制的转录，酶 的生成将不再需要诱导剂或不再被末端产物或分解代谢物阻遏，这样的突变株称为 组成型突变株。少数情况下，组成型突变株可产生大量的、比亲本高的多的酶，这种突变株称为超产突变株。 组成型突变株 结构基因不受控制地转录，酶的生成将不再需要诱导剂或不再被末端产物或分解代谢物阻遏。 调节基因发生突变 产生无效的阻遏物而不能与操纵基因结合 操纵基因突变 突变操纵基因不能与阻遏物结合 组成型突变 5.条件致死 例如在抗生素和酶制剂生产过程中的应用。 6.细胞膜通透性突变体的应用 *