第十五篇 色谱分析法导1.pptVIP

第十五章 色谱分析法导论 §15-1 概 述 §15-2 色谱分离原理 §15-3 色谱法基本理论 §15-4 分离度 §15-5 色谱定性分析 §15-6 色谱定量分析 §15-1 概 述 一、 色谱法 色谱法是一种分离、分析多组分混合物的技术。俄国植物学家茨维特在1906年使用的色谱装置如图15-1所示。试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱分离柱中的两相间不断进行分配的过程。 固定相 流动相 §15-2 色谱分离原理 一、分离原理 气相色谱分离过程是在色谱柱内完成的，气固色谱和气液色谱，两者的分离机理不同。 气固色谱的固定相： 多孔性的固体吸附剂颗粒，其分离是基于固体吸附剂对试样中各组分的吸附能力的不同。 气液色谱的固定相：由担体和固定液所组成，其分离是基于固定液对试样中各组分的溶解能力的不同。 §15-3 色谱法基本理论 一、塔板理论—柱分离效能指标 色谱柱长L，虚拟的塔板高度H，色谱柱的理论塔板数为n，则三者的关系为： n = L / H n,H ——柱效能的指标 理论塔板数与色谱参数之间的关系为： §15-4 分离度 一、分离度的定义 §15-5 气相色谱定性分析 一、利用纯物质对照定性 通过比较试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质。 二、利用加入纯物质峰高增加定性 将纯物质加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化，峰高增加的组分可能为这种纯物质。 三、利用相对保留值定性 §15-6 气相色谱定量分析 定量依据：在一定操作条件下，检测器的响应信号与进入检测器的被测组分的质量（或浓度）成正比：mi = fiAi 式中mi为被测组分i的质量；Ai为被测组分i的峰面积；fi为被测组分i的校正因子。 一、 峰面积的测量 峰高（h）乘半峰宽（Y1/2）法：近似将色谱峰当作等腰三角形。此法算出的面积是实际峰面积的0.94倍：A = 1.065 hY1/2 难分离物质对的分离度大小受色谱过程中两种 因素的综合影响：保留值之差─色谱过程的热力 学因素； 区域宽度─色谱过程的动力学因素。 分离度作为柱的总分离效能指标。 塔板理论和速率理论都难以描述难分离物质对的实际分离程度。即柱效为多大时，相邻两组份能够被完全分离。 色谱分离中的四种情况如图所示： ①柱效较高，△K (分配系数)较大,完全分离； ② △K 不是很大，柱效较高，峰较窄，基本上完全分离； ③柱效较低，，△K 较大,但分离的不好； ④ △K 小，柱效低，分离效果更差。 图15-7 分离度示意图 当两峰等高，峰形对称且符合正态分布时： R=0.8，两峰的分离程度可达89%； R=1，分离程度98%； R=1.5，达99.7%（相邻两峰完全分离的标准）。 二、分离度与柱效能和选择性的关系 若相邻两峰的峰底宽相等，引入相对保留值和塔板数，可导出下式： 例题： 在一定条件下，两个组分的保留时间分 别为85秒和100秒，要达到完全分离，即R =1.5 。计算需要多少块有效塔板。若填充柱的塔板 高度为0.1 cm，柱长应是多少？ 解：r21= 100 / 85 = 1.18 n有效 = 16R2 [r21 / (r21 —1) ]2 = 16×1.52 ×(1.18 / 0.18 ) 2 = 1547（块） L有效 = n有效·H有效 = 1547×0.1 = 155 cm 即柱长为1.55m时，两组分可以得到完全分离。 例2. 已知物质A和B在一根22.5cm长的柱上的保留时间分别为14.4和15.4min，不被保留组分通过该柱的时间为4.2min，峰底宽度为1.07和1.16min，试计算：（1）柱的分离度 （2）相对保留值 （3）提供分离度为1.5时，所需的柱长 （4）分离度为1.5时，分离A，B所需的时间。 解： （1） ＝0.897 r21=(tR2-tM)/(tR1-tM)=(15.4-4.2)/(14.4-4.2) =1.10 L1/L2 = R12/R22 L1=63cm tR1/tR2 = R1/R2=1.67 tR1=25.75min 相对保留值r21仅与柱温和固定液性质有关。在许多色谱手册和书籍中，都列有各种物质在不同固定液上的保留数据，可以用来进行定性鉴定。 四、利用保留指数定性 保留指数又称Kovats指数，是一种重现性较好的定性参数。 保