第三篇 液相色谱法.pptVIP

第3章 高效液相色谱法 4.1.3. 主要部件 (2) 梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器 d. 荧光检测器 1. 流动相特性 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 有机氯农药残留量分析 化学键合固定相的特点 稠环芳烃的分析 离子交换色谱分离固定相 4.2.5. 尺寸排斥色谱size- exclusion chromatography 4.2.6. 亲和色谱 Affinity chromatograph 1. 离子色谱法原理 离子色谱连续抑制装置图 4． 离子色谱的应用 2. 超临界流体性质 3.原理 程序升压 2.主要部件 蜂皇浆中壬烯双酸的分析—LC ◆ 说明 蜂皇浆作为食品和中药已广为人知，但其中的10—羟基—δ—壬烯双酸(10-HDA)是蜂皇浆中的特有成分，它的含量和检查方法是蜂皇浆组成基准中的重要项目。它的分析例如下所示。 ◆ 前处理法 采取一定量的试样，加蒸馏水混合溶解，加一定量的内标(安息香酸/甲醇)后，用0.45μm的一次性过滤器过滤。 ◆ 分析条件： 柱 ：STR ODS-II(4.6mmΦ×150mm) 流动相 ：10mM磷酸钠缓冲液/甲醇=55/45(V/V) 流量 ：1.0mL/min 温度：40℃ 检测 ：紫外吸光度 λ=210nm 离子交换色谱法检测三聚氰胺 1. 提取液: 乙腈 2. 流动相: 0.05%磷酸二氢钾水溶液-乙腈(70:30) 3. 色谱柱: SCX离子交换色谱柱(250mm×4.6mm) 4. 检测器:紫外检测器, 波长 240nm LC-MS(高效液相色谱-- 质谱联用)检测三聚氰胺 色谱条件 流动相: 乙酸铵水溶液 -- 甲醇(90:10) 色谱柱: C18反向柱 150mm × 2.1mm 质谱条件 电离方式:电喷雾电离源(ESI) 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 M.W. tR M.W. tR M.W. tR M.W. tR 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 以无机、特别是无机阴离子混合物为主要分析对象, 在七十年代出现、八十年代迅速发展。 传统离子交换色谱存在着两个难于解决的问题： (1)需要高浓度淋洗液洗脱且洗脱时间很长； (2)洗脱后的组分缺乏灵敏、快速的在线检测方法。 4.3 离子色谱法 离子交换原理，与传统离子交换的不同点： 采用交换容量非常低的特制离子交换树脂为固定相； 细颗粒柱填料，高柱效；采用高压输液泵； 低浓度淋洗液或本底电导抑制（在分离柱后，采用抑制柱来消除淋洗液的高本底电导）； 可采用电导检测器，快速分离分析微量无机离子混合物； 各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。 阴离子分析: 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/hr。 七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在3～50 ppm。 1.概述 超临界流体：在高于临界压力与临界温度时，物质的一种状态。性质介于液体和气体之间。 超临界流体色谱(SFC)，80年代快速发展，具有液相、气相色谱不具有的优点: （1）可处理高沸点、不挥发试样； （2）比LC有更高的柱效和分离效率。 4.4 超临界色谱 (SFC) Supercritical Fluid Chromatograph （1）性质介于液体和气体之间; 具有气体的低黏度、液体的高密度，扩散系数位于两者之间。 （2）可通过改变超临界流体的密度（程序改变）调节组分分离（类似于气相色谱的程序升温，液相色谱中的梯度淋洗）。 超临界流体的密度与压力有