结核感染T细胞斑点试验检测胸腔积液和外周血对结核性胸膜炎的诊断价值.docVIP

结核感染T细胞斑点试验检测胸腔积液和外周血对结核性胸膜炎的诊断价值 　　[摘要] 目的 评价结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）检测胸腔积液和外周血对结核性胸膜炎（TBP）的诊断价值。方法 前瞻性纳入2013年6月～2015年8月潍坊市人民医院疑诊为结核性胸腔积液患者84例，分离患者胸腔积液单个核细胞（PEMCs）及外周血单个核细胞（PBMCs）进行T-SPOT.TB检测。比较两种标本MTB特异性抗原ESAT-6和CFP-10刺激后斑点形成细胞（SFCs）数量及其诊断特性，SFCs数量均值采用中位数（M）或四分位数间距（P25，P75）表示。 结果 根据临床诊断和分组标准，最终诊断TBP患者48例，非结核性胸膜炎（NTBP）患者36例；PBMCs和PEMCs T-SPOT.TB检测诊断TBP的灵敏度为81.3%和97.9%（P 0.05），阳性预测值为90.7%和 87.0%（P 0.05），阴性预测值为78.1%和97.6%（P 0.05）. The specificities of T-SPOT.TB on PBMCs and PEMCs for the identification of NTBP were 88.9% and 80.6%， respectively （P 0.05）， and the negative prediction values were 78.1% and 97.6% （P 　　[Key words] Tuberculous pleurisy； T-cell enzyme-linked immunospot assay； Pleural effusion； Peripheral blood； Diagnostic value 结核性胸膜炎（tuberculous pleurisy，TBP）是一种常见的肺外结核，约占渗出性胸腔积液病因的54.8%[1]，结核分枝杆菌直接侵入胸膜或经淋巴管血行播散至胸膜是该病的主要发病机制。TBP缺乏特异性临床表现，早期诊断存在一定难度，传统的实验室诊断方法阳性检出率低[2-3]，胸膜活检因有创伤性难以广泛应用。结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是近年来发展起来的一种诊断结核病的细胞学检测技术，它是应用MTB特异性抗原（ESAT-6、CFP-10）体外刺激单个核细胞，通过检测分泌γ干扰素（interferon-γ，IFN-γ）的特异性致敏T细胞数量来判断是否存在结核菌感染，不受卡介苗接种和非结核分枝杆菌的影响，其敏感性和特异性均高于其他常规检测方法[4-5]。本研究应用T-SPOT.TB技术检测胸腔积液单个核细胞（Pleural effusion mononuclear cells，PEMCs）和外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）中效应T细胞数量，评价PBMCs和PEMCs标本T-SPOT.TB检测对TBP的临床诊断价值 1 资料与方法 1.1 一般资料 前瞻性纳入2013年6月～2015年8月潍坊市人民医院呼吸内科、胸外科、肿瘤内科和消化内科住院疑诊TBP患者84例，其中男53例，女31例，年龄18～84岁。根据患者临床表现、病史及合并症、影像学、细菌学和组织病理学检查、胸水常规、生化、癌胚抗原等检查，以及抗结核治疗反应，对所有病例进行诊断评估，研究对象均无艾滋病毒感染和严重的肝肾功能损伤。按照最终是否诊断为TBP分为TBP组和非TBP（NTBP）组 1.2 诊断标准 1.2.1 TBP诊断标准 ①实验室诊断：有细菌学和病理学诊断证据，如胸腔积液结核杆菌培养阳性，胸膜病理活检发现干酪样坏死等结核典型改变。②临床诊断：有结核病史；有相应的临床表现，如发热、盗汗、疲乏、刺激性干咳、胸痛等；穿刺胸腔积液为渗出液，其中淋巴细胞增多；腺苷脱氨酶活性增高；未见肿瘤细胞，且各项肿瘤标志物阴性；结核菌素试验强阳性；常规治疗无效，经抗结核治疗2～4周好转，最终确诊[6] 1.2.2 NTBP诊断标准 临床排除结核病，并已确诊为其他疾病，随访1～3个月无结核病表现者 1.3 方法 1.3.1 外周血T-SPOT.TB检测 采集静脉血5 mL于肝素抗凝管，充分混匀，送检；淋巴细胞分离液分离PBMSCs，最后用AIM-V配制0.5 mL含有2.5×105/mL PBMCs的细胞悬液，每份标本设阴性、A、B和阳性4个孔，分别加入AIM-V培养基、A抗原、B抗原和阳性对照各50 μL，每孔加稀释好的PBMCs细胞悬液各100 μL，置37℃ 5%CO2培养箱孵育16～20 h，PBS洗板4次；然后每孔加入碱性磷酸酶标记的二抗，2～8℃孵育1 h；PB