鼻咽癌外周血单个核细胞和血浆中EB病毒DNA水平变化及与放化疗疗效的关系.docVIP

鼻咽癌外周血单个核细胞和血浆中EB病毒DNA水平变化及与放化疗疗效的关系 　　[摘要] 目的 比较鼻咽癌患者放化疗治疗前后外周血单个核和血浆EBV DNA水平的动态变化，探讨EBV DNA水平与鼻咽癌放化疗近期疗效的关系。 方法 采用实时荧光定量PCR方法分别测定整群选取的2015年7―11月福建省肿瘤医院放疗科收治的75例初诊鼻咽癌患者放化疗前后外周血单个核细胞和血浆EBV DNA水平，根据疗效评价分为CR、PR、SD、PD组，各组治疗前后外周血单个核细胞和血浆EBV DNA水平分别进行比较；对配对的75例治疗前鼻咽癌患者外周血单个核细胞和血浆EBV DNA水平进行检出率和相关性分析。 结果 CR、PR组外周血单个核细胞和血浆EBV DNA治疗前后下降明显，差异有统计学意义（P0.05）。外周血单个核细胞和血浆EBV DNA总体检出率为78.7%、53.3%，差异有统计学意义（P 0.05）. Peripheral blood mononuclear cells and plasma EBV DNA overall detection rate of 78.7%， 53.3%， obvious difference（P 　　1.1 一般资料 研究对象为整群选取福建省肿瘤医院放疗科收治的75例首诊鼻咽癌患者，男55例，女20例，年龄12～75岁，中位年龄48岁。全部病例均经病理活组织检查证实，依照“鼻咽癌2008分期”标准[3]进行临床分期。75例鼻咽癌患者的临床病理资料见表1。同时收集35名健康人群作为治疗前对照 病理分型I：角化型鳞状细胞癌；II：非角化性癌；III：基底细胞鳞状细胞癌 1.2 治疗方法 所有患者均接受直线加速器根治性放疗，5次/周，总量65～70 Gy。除1例II期患者未行化疗外，其余患者采取顺铂加5-氟尿嘧啶诱导化疗，每3周1次，共2个疗程或铂类单药同步化疗，每3周1次，共3个疗程。所有患者均完成全部治疗计划 1.3 疗效评价 所有患者完成治疗计划后3个月，依据体格检查、鼻咽镜、核磁共振成像等结果进行近期疗效评价，依据WHO实体瘤评价标准分为完全缓解（complete remission， CR）、部分缓解（partial remission， PR）、稳定（stable disease， SD）和进展（progressive disease， PD）组 1.4 EBV DNA检测 所有入组患者治疗前、治疗全部结束后各采集静脉血1次 1.4.1 试剂和仪器 采用实时荧光定量PCR方法检测EBV DNA。批号2015007，仪器为美国ABI 7500荧光定量PCR仪 1.4.2 标本处理 EDTA抗凝全血2 000 rpm10 min，取上清50 μL血浆备用；另取EDTA抗凝全血加入淋巴细胞分离液（批1237），按试剂操作说明书进行外周血单个核细胞（PBMCs）收集 1.4.3 核酸提取及PCR反应 将待检PBMCs和血浆分别按照EBV DNA检测试剂盒操作说明书进行核酸提取：50 μL DNA裂解液振荡混匀，100℃干浴10 min，13 000 rpm 5 min，各取2 μL上清进行PCR反应。反应参数： 93℃预变性 2 min，93℃变性45 s，55℃退火及延伸60 s，10个循环，93℃30 s，55℃ 45 s，30个循环。同步扩增试剂盒内标准品和质控品，根据标准曲线CT值由仪器分析软件自动计算各样本病毒拷贝数，500 copies/mL判为阳性；质控品用于监控反应 1.5 统计方法 使用SPSS 11.0统计软件进行数据处理。EBV DNA阳性率计数资料比较采用χ2检验，EBV DNA在组间的分布以中位数M及四分位数间距 （P25，P75） 表示，治疗前后EBV DNA的比较采用配对秩和检验；计量资料的相关关系分析采用双变量相关分析（Spearman法），显著性水准为0.05 2 结果 ①以500 copies /mL为最低检测下限，75例初诊鼻咽癌患者治疗前PBMCs和血浆EBV DNA阳性率分别为78.7%（59/75）、53.3%（40/75），健康对照组PBMCs和血浆EBV DNA阳性率分别为2.8%（1/35）、0（0/35） 。鼻咽癌两种类型标本均阳性者有26例，均阴性者有14例，鼻咽癌两种标本阳性率经χ2检验，差异有统计学意义（P0.05） 3 讨论 实时荧光定量PCR具有高灵敏度、准确快速等特点，近年来广泛用于临床病毒学定量检测。传统的鼻咽癌实验室检查以EB病毒壳抗原抗体（VCA-IgA抗体）等相关血清抗原和抗体标志物为主，近年研究认为EB病毒DNA是鼻咽癌早期诊