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实训 应用紫外线诱导筛选耐高糖的谷氨酸高产菌株 试验目的 通过紫外线诱变筛选耐高糖的谷氨酸高产菌株 试验原理 紫外线是一种最常用的物理诱变因素。 主要作用是使DNA双链之间或同一条链上的两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对，从而引起突变。 操作在红光下进行，并且将照射处理后的微生物放在暗处培养。 谷氨酸棒杆菌是谷氨酸生产菌种，是生物素缺陷型菌株。 生物素缺陷型菌株是指只有在加入了生物素的培养基中才能生长的菌株。 生物素（Biotin）为B族维生素之一，又称维生素H、维生素B7、辅酶R等。 菌种通过紫外线诱变处理后利用含有茚三酮的高糖选择性平板培养，耐高糖、产酸的菌株不但能够在平板上长出菌种，而且菌落周围呈现红色。根据平板上菌种生长请款可以得到耐高糖产酸的突变株，再经过摇瓶初筛、复筛可获得耐高糖、高产的突变株。 选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。 意义 耐高糖菌种的选育对发酵工艺上提高发酵培养基初糖浓度具有积极的意义。 操作步骤 菌悬液的制备 诱变处理 预热紫外灯 预热20min，使紫外线强度稳定 加菌悬液 紫外线照射 对紫外线照射时间做水平试验，40s、60s、80s、100s、120s 照射计时从培养皿开盖起，加盖止；从紫外线照射处理开始，直到涂布完平板的所有操作都必须在红灯下进行。 稀释菌液及涂布选择性培养基 纯种分离方法 稀释分离 倾注平板法 涂布平板法 培养 将涂布好的平板用黑纸包好，倒置，于32摄氏度培养48h 菌落计数、计算致死率以及绘制致死率曲线 以诱变时间为横坐标、致死率为纵坐标绘制致死率曲线 观察诱变效应及挑取菌落 摇瓶产酸筛选 初筛 复筛