13植株中磷的测定—钒钼黄比色法.docVIP

植株中磷的测定——（H2SO4—H2O2消煮，钒钼黄比色法） 1方法原理 植物样品经H2SO4—H2O2消煮分解制备的待测液中正磷酸能与偏磷酸盐和钼酸盐在酸性条件下作用，形成黄色的杂聚化合物钒钼酸盐，其组成还不能十分肯定，有人认为是P2O5·V2O5·22MoO3·nH2O。溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量成正比，可用比色法测定磷的含量。比色时可根据溶液中磷的浓度选择比色波长400～490nm，磷的浓度高时选择较长的波长，较低时选用较短的波长。钒钼黄法要求比色液中酸的浓度（即终浓度）很宽，极限是0.04～1.6mol·L-1（H+）；酸度太高时显色不完全或不显色，太低时则可能生成沉淀或其他物质的颜色。钒酸盐的终浓度范围是8.0×10-5～2.2×10-3mol·L-1，通常用后一种浓度。钼酸盐的终浓度范围是1.6×10-3～5.7×10-3mol·L-1。在正常的室温变化范围内对黄色强度无影响。黄色发生很快，在最初15min内会降低约1.3%，以后至少2h内很稳定，在24h内也无显著变化。 本法操作简便迅速，准确度和重复性较好，相对误差为1%～3%；灵敏度较钼蓝比色法低，适测范围为1～20mg·L-1；对酸的浓度要求不严格，容易控制，在HNO3、HCl、H2SO4、HClO4等介质中都可适用；干扰离子少，特别是Fe3+的允许量远高于钼蓝法。因此，该法广泛用于植物和有机肥料样品中磷的测定。 2主要仪器 消煮管（瓶）、控温消煮炉、分光光度计。 3试剂 钒钼酸铵试剂。 称取（NH4）6MoO24·4H2O 12.5g溶于200mL水中。另将偏钒酸铵（NH4VO3）0.625g溶于沸水150mL中，冷却后，加入浓HNO3 125mL，再冷却至室温。将钼酸铵溶液缓慢地注入钒酸铵溶液中，随时搅拌，用水稀释至500mL。 6 mol·L-1 NaOH溶液。 称取NaOH 24g溶于水，稀释至100mL。 2,4-二硝基酚指示剂。 2,4-二硝基酚0.25g溶于100mL水中。其变色范围是pH2.4（无色）～4.0（黄色）。变色点是pH3.1。 50μg·mL-1 P标准溶液。 准确称取经105℃烘干的KH2PO4 0.2195g，溶于水，移入1000mL容量瓶，加水至约400mL，加浓硫酸5mL，用水定容。装入塑料瓶中低温保存备用。 浓H2SO4。 300g·L-1 H2O2。 4操作步骤 4.1待测样品的准备 称取磨细烘干的植物样品（过0.25～0.5mm筛）0.1000～0.2000g，置于100mL开氏瓶或消化管中，先用水湿润样品，然后加浓H2SO4 5mL，轻轻摇匀（最好放置过夜），瓶口放一个弯颈漏斗，在消化炉上先低温缓缓加热，待浓硫酸分解冒白烟逐渐升高温度。当溶液全部呈棕黑色时，从消化炉上取下开氏瓶，稍冷，逐滴加入300g·L-1 H2O2 10滴，并不断摇动开氏瓶[1]，以利反应充分进行。再加热至微沸10～20min，稍冷后再加入H2O2 5～10滴。如此反复2～3次，直至消煮液呈无色或清亮色后，再加热5～10min，以除尽过剩的双氧水[2]。取出开氏瓶冷却，用少量水冲洗小漏斗，洗液洗入瓶中。将消煮液用水定容至100mL，取过滤液（或取放置澄清的上清液）供N、P、K等元素的测定。消煮时应同时做空白试验以校正试剂误差。 4.2显色 吸取消煮好经过滤的待测液20～25mL（含P 0.25～1.0mg），置于50mL容量瓶中，加2,4-二硝基酚指示剂2滴，用6mol·L-1 NaOH 溶液中和至刚呈黄色，加入10.00mL钒钼酸铵试剂，用纯水定容，同时做空白试验。放置15min后用波长450nm，在分光光度计上比色，以空白液调节仪器零点。 4.3标准曲线制作。 分别吸取50μg·mL-1 P标准溶液0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0于50mL容量瓶中，加2,4-二硝基酚指示剂2滴，用6mol·L-1 NaOH 溶液中和至刚呈黄色，加入10.00mL钒钼酸铵试剂，用纯水定容，放置15min后波长450nm下比色测定。该标准系列P的浓度分别为0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0 μg·mL-1。以吸光值为纵坐标，磷的μg·mL-1为横坐标，绘制工作曲线。 5结果计算 式中： C——从标准曲线查得显色液P的质量浓度（μg·mL-1）； C0——空白值（μg·mL-1）； V——显色液体积（mL）； D——分取倍数，即消煮液定容体积（mL）/ 吸取消煮液体积（mL）； m——干样品质量（g）。 注解： [1] H2O2滴加时应直接滴入瓶底溶液中，若滴在瓶壁上，H2O2会很快分解，失去氧化效果。 [2] 溶液中残余的H2O2需要加热分解