P16Ink4aP14ARF在大肠癌中抑癌地位的初步研究.docVIP

P16Ink4a、P14ARF在大肠癌中抑癌地位的初步研究 　　作者：吕光军,成志刚,杨,光　　作者单位：200002 上海市黄浦区中心医院外科 　　【摘要】目的 研究P16Ink4a、P14ARF在大肠癌中的表达，了解P16Ink4a、P14ARF在大肠癌进展中的作用。方法 采用免疫组织化学方法检测30例大肠癌患者中P16Ink4a、P14ARF的表达情况。结果 P16Ink4a表达阳性而P14ARF阴性的有3例，而P16Ink4a阴性、P14ARF阳性的有14例。结论 P16Ink4a、P14ARF在大肠癌发生发展中发挥着不同的作用，存在某种互补性。 　　【关键词】 大肠癌;P16Ink4a;P14ARF 　　P16Ink4a、P14ARF damp the cancer status in the colon cancer the preliminary study　　Lu Guangjun, Cheng Zhigang, Yang Guang　　Department of surgery, Central Hospital of Huangpu District Shanghai 200002, China 　　【Abstract】 Objective To study the expression of P16Ink4a、P14ARF in colorectal carcinoma for the purpose of understanding the role of P16Ink4a、P14ARFin the progression of tumors. Methods Expression of P16Ink4a、P14ARF was examined by immunohistochemical method, all data tested by x 2 test. Results In 30 case of colorectal carcinoma, negative expression of P16Ink4a but positive expression of P14ARF protein were detected in 14 cases, and the expression of P16Ink4a but negative expression of P14ARF were detected in 3 cases. Conclusion P16Ink4a and P14ARF play different role in the progression of colorectal cancer.Expression and significance of P16Ink4a、P14ARF in colorectal cancer. 　　【Key words】 Colorectal cancer; P16Ink4a;P14ARF 　　目前普遍认为P16Ink4a与大肠癌的生物学行为相关[1]，但最近研究认为，INK4a基因可利用不同的读码框，编码另一个与P16Ink4a功能完全不同的蛋白，即P14ARF蛋白。INK4a失活的最常见原因是突变，其中仅50%的突变影响P16Ink4a，另有50%发生于外显子2，故可能同时影响P16Ink4a、P14ARF[2]。由于这一机制的发现，使得P16Ink4a、P14ARF在大肠癌发生发展中何者是真正的抑癌基因变得模糊起来。本文采用免疫组化的方法检测30例大肠癌中P16Ink4a、P14ARF的表达情况，以期对两者在大肠癌中抑癌基因地位作一初步探讨。 　　1 材料和方法 　　1.1 临床资料 本组30例大肠癌病例取至2006年1月至2007年12月黄浦区中心医院手术切除病例，术后均经病理证实。男19例，女 11例;年龄 46～74岁，中位年龄62岁;肿瘤部位：结肠25例，直肠5例。临床分期按国际抗癌联盟TNM。 　　1.2 主要试剂 P16Ink4a、P14ARF单克隆抗体皆为美国 Santa CruzBiotechnology 公司产品。ABC试剂盒购自上海华美公司。 　　1.3 免疫组织化学方法 采用亲和素mdash;生物素复合物-过阳化物酶连接法(avidin biotin-pcroxidasc complcx, ABC)免疫组化法染色。每次实验均以PBS代替一抗作为阴性对照。主要步骤如下：①常规脱腊，PBS冲洗，5min×3次。②切片浸入0.3%过氧化氢甲醇中30分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性，PBS冲洗，5min×3次。③玻片置入 0.01mmol/L，PH6.0的枸