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首页 raquo; 资讯 raquo; 实验常识 raquo; 正文 双缩脲法测定蛋白质含量
发布日期:2008-07-03 来源:丁香通 浏览次数:310
双缩脲法测定蛋白质含量: 一、 教学目的与要求: ① 加强对蛋白质的有关性质的认识; ②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和
双缩脲法测定蛋白质含量:
一、 教学目的与要求:
① 加强对蛋白质的有关性质的认识;
②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法;
③对学生所学进行综合的测试。
二、 教学实验原理:
蛋白质含有两个以上的肽键,因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关,因此利用此进行比色测定蛋白质含量。
在一定条件下,未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应,并于540—560nm下比色,可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度,标准蛋白溶液可以用结晶的牛(或人)血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。
除-CONH-有此反应外,-CONH2-,-CH2-,NH2-,-CS-CS-NH2,等基团亦有此反应。
三、 考核主要内容
1、 标准曲线的制作
取6支干净的试管,按0→5编号,然后按下表依次加入试剂,充分混匀,在室温下放置半小时,以管为空白,在550nm波长处测定消光值(OD),以各管蛋白质含量(毫克)横坐标,OD值为坐标,画出标线。
编号012345
蛋白质标准液(毫升)00.20.40.60.81.0
蒸馏水(毫升)1.00.80.60.40.20
双缩脲试剂(毫升)4.04.04.04.04.04.0
2、 样品测定:取样品液1.0 ml,同法进行,测其OD值,对照标准曲线求得未知液蛋白质浓度。
3、 分光光度计的使用:规定每组在10min以内全部完成操作(共测6支管);同时注意操作是否规范。
4、
成绩的计算:此次的实验占30%(包括平时的表现及实验报告的完成情况和完成质量),平时的五次实验共占70%,每次实验按总分为5分为满分进行打分,总评折合成百分制。
四、 实验注意事项:
① 标准样品的浓度为:10μg/ml;
② 实验过程中不得过问他人,同组人可以配合进行;
③ 实验报告在课堂上独立完成,同组人数据相同,不得抄袭他人数据,一旦发现以零分处理;
④ 实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做;
⑤ 对实验结果进行简单的分析.
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