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温和气单胞菌RC-07-KA株溶血素基因克隆、表达及活性检测.pdf
第 34 卷第3 期 中国预防兽医学报 Vo 1. 34 ,No.3
2012 年 3 月 Chinese Joumal of Preventive Veterinary Medicine Mar. 2012
doi: 10.3969!j .issn.l008-0589.2012.03 .09
温和气单胞菌 RC一07-KA 株溶血素基因克隆、
表达及活性检测
程方俊 l ， 2 ，徐兴然 lJ ，宋振辉 l ，陈 铭 l ，黄建国 2*
(1 西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 402460; 2. 西南大学资源环境学院，重庆 400715; 3 西南大学药学院，重庆 400715)
摘 要:为研究温和气羊胞菌(A. sobria)溶血素基因的特性，本研究根据 GenBank 登录的气单胞菌属溶血素基
因序列设计一对引物，经 PCR 扩增得到大小约1.5 kb 的 A. sobria RC-07-KA 株溶血基因片段，将该片段克隆到
pGEM-T 载体，测序结果显示:溶血素基因片段大小为 1467 坤，编码 487 个氨基酸残基，遗传进化分析结果表
明该基因与气羊胞菌属中的 A. hydrophila 茵株 Sb (AY611033) 、 NLEP A-1607 (AF410466) 、 AEF (HM853019) ,
A. sobria 茵株 357 (AYI57998)、人源分离株(EF620533)和 A. salmonicida 茵株 17-2 (X65048)的溶血素基因亲缘关系
95 %，而与其他菌株的同源性较低。通过构建溶血素重纽表达质粒pET-Hly ，诱导表达并通过
较近，同源性大于
westem blot 鉴定表达蛋白，结果显示重组茵能高效表达重组溶血素，而且纯化的重组溶血素具有溶解鲤鱼红细
胞的活性。为该菌进一步深入研究奠定了基础。
关键词:温和气羊胞菌 RC-07-KA 株;溶血素基因;表达;活性
中国分类号: S852.61 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2012)03-0201-05
Cloning and expression of hemolysin gene from
Aeromonas sobria and its haemolysis reactivity
1 1 1 1
CHENG Fang-jun 气 XU Xing-ran 气 SONG Zhen-hui , CHEN Ming , HUANG Jian-guo2*
(1. Veterinary Medicine Departments , Southwest University Rongchang Campus , Chongqing 402460 , China;
2. College ofresources and environrnents , Southwest University , Chongqing 400715 , China;
3. College of Pharmaceutica1 Sciences , Southwest Univers町， Chongqing 400715 , China)
Abstract: To study the characteristics of Aeromonas sobria hemolysin , the hemolysin gene was
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