洪湖碘泡虫PCR检测方法的建立与初步应用.pdf

淡水渔业 ，2017，47 (1)：12—16 2017年 1月 FreshwaterFisheries Jan．20l7 洪湖碘泡虫 PCR检测方法的建立与初步应用 李 丹 一，柳 阳 一，翟艳花 一，顾泽茂 (1．华中农业大学水产学院，武汉430070；2．淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心，武汉430070； 3．农业部淡水生物繁育重点实验室，武汉 430070) 摘要：为建立一种灵敏、特异的快速检测异育银鲫寄生洪湖碘泡虫 (Myxobolushonghuensis)的方法 ，本研究根据 洪湖碘泡虫 ITS一5．8SrDNA基因序列筛选出一对特异性引物 MhF／R，建立 PCR检测方法，对反应条件进行优 化，并通过特异性试验、灵敏性试验与临床检测验证其可行性。结果显示，建立的PCR检测方法能特异性扩增 洪湖碘泡虫相应的基因片段 ，长度为479bp，而对试验 中其他 9种粘孢子虫的扩增结果均为f；月性 ；最低能检测 0．1pg的虫体基因组 DNA。通过临床样品检测 ，PCR方法 比显微镜检测的检出率提高了 19．5％。结果表明，该 PCR方法特异、灵敏，适用于洪湖碘泡虫的快速检测。 关键词：洪湖碘泡虫 (Myxobolushonghuensis)；ITS一5．8SrDNA；PCR检测；显微镜检测 中图分类号：s917 文献标识码：A 文章编号：1000-6907一(2017)Ol-0012-05 Developmentandpreliminaryapplication ofPCR methodforthedetection ofMyxobolushonghuensis(Myxosporea：Bivalvulida) LIDan ， ，LIU Yang，，一，ZHAIYan—hua，‘ GU Ze—ITlao，， ． (1．DepartmentofAquaticAnimalMedicine，CollegeofFisheries，Huazhong gricuhuralUniversity，Wuhan430070，Chimt； 2．FreshwaterAquacultureCollaborativeInnovationCenterofHubeiProvince，Wuhan430070，China； 3．KeyLabofFreshwaterAnimalBreeding，MinistryofA icuhure，Wuhan43o070，Cina) Abstract：Toestablishasensitive，specificandrapidmethodfordetectionofMyxobolushonghuensisinfectingallogynoge— neticgibelcarpCarassiusauratusgibelio(Bloch)，asinglePCRmethodwasdevelopedwithprimersMhF／Rtargetingon itsITS一5．8SrDNA gene．Afteroptimizatingthereactionconditionandsystem ，aseriesofexperimentsonspecificityand sensitivitywereconducted．Additionally，36fieldsamplesweretestedbytheestablishedPCR andmicroscopicexamina— tion．TheresultsshowedthatthedevelopedPCRmethodwasspecifictoamplifya479bpfragmentusinggenomicDNA from