2预处理和菌体的破碎.pptVIP

第二章 预处理和细胞的破碎 2.1 固液分离的分类 2.2 发酵液的组成 2.3 悬浮液的预处理 预处理的目的 预处理方法 2.4 细胞破碎方法 2.5 细胞破碎理论 2.6 细胞破碎技术 2.7 细胞破碎方法的选择及评价 2.1 固液分离的类型 1、过滤: 重力过滤器、压滤器、真空过滤器 2、离心 3、重力沉降 4、气浮分离：在水中通入或设法使水体产生大量微细气泡，附着于杂质颗粒上，密度小于水而浮至水面，从而获得分离的一种澄清方法。固液分离：处理固体颗粒粒度细小，很难用沉淀法分离。液液分离：用于从污水中分离回收石油，有机溶剂的微细油滴、表面活性剂及各种金属离子。 2.3 悬浮液的预处理 凝聚剂:指的是让不稳定的胶体微粒（或者凝结过程中形成的微粒）聚合在一起形成集合体的过程中所投加的药剂的统称。 种类：A、无机盐类，如硫酸铝、明矾、硫酸铁、硫酸亚铁、FeCl3、AlCl3、ZnCl、硫酸镁等；B、无机碱，如Al(OH)3、Fe(OH)3、Ca(OH)2、CaO等；C、聚合无机盐，如聚合铝、聚合铁。 机理：A、破坏双电层，B、水解后胶体吸附，C、氢键结合等。 絮凝：在絮凝剂高分子聚合电解质的作用下，胶体颗粒和聚合电解质交连成网，形成10 mm大小的絮凝团过程。絮凝剂种类：A、阳离子类，如聚丙烯酰胺(+)、聚苯烯酸二烷基胺乙酯、聚二烯丙基四胺；B、阴离子类，如聚丙烯酸纳、聚苯乙烯磺酸、聚丙烯酰胺(-)；C、非离子类，如聚丙烯酰胺(0)、环氧化乙烯。 机理：絮凝剂主要起中和电荷、桥架和网络作用 细胞产物 物理法 化学法 固体剪切法(珠磨法) 酶溶法 液体剪切法 化学降解法（酸碱法） 撞击法 表面活性剂法 超声法 有机溶剂膨胀法 渗透法 萃取法 2.4 细胞破碎方法 细胞破碎物理法和化学法的比较 物理破碎法缺点： A、高能、高温、高噪音、高剪切力(四高)，易使产品变性失活； B、非专一性，胞内产物均释放，分离纯化困难； C、细胞碎片大小不一，难分离。 化学破碎法缺点： A、费用高； B、引起新的污染，尤其是其他化学方法； C、一般只有有限的破碎，常需与其他物理法连用。 2.7 细胞破碎技术 1)、固体剪切法(珠磨法, 最有效的物理破碎法) 操作简介 2.7 细胞破碎技术 计算 破碎遵循一级动力学定律, 即 对上述方程积分得 对于n次连续搅拌研磨操作，则得蛋白质的物料平衡式 ?：平均停留时间，V：磨腔的总体积，Q：发酵液的流量。 2.7 细胞破碎技术 影响因素 a) 转盘外缘速度(见下图)： 适合条件：圆盘外缘速度 20 m/s, 一般在 5-15 m/s。 b) 珠粒添量和大小 添量：(见上图，添量体积一般占总体积的80-90%) 粒径：一般在0.2mm(实验室), 0.4 mm(工业)。最终由实验确定 2.7 细胞破碎技术 c) 温度：温度在5-40?C范围内对破碎影响较小。但研磨产热，功率? ，温度? 。如产物热不稳定，必须控温。 d) 细胞浓度x：最佳x由实验确定。一般产热量随细胞浓度的降低而下降，但单位细胞重量的能耗? 。 e) 破碎效率： R：每kg成品细胞(如酵母)释放的蛋白量，Q：物料流量，P’：珠磨机消耗的功率。 f) 流量Q：破碎为一级反应。 2.7 细胞破碎技术 计算 服从一级反应定律 式中，R为pro释放量，Rm为pro最大释放量. 影响因素 操作压力p：p?, R? ;相反, R? 。温度? 2?C /10MPa 。 破碎次数N：N?，R ?。 温度：比速度k与温度有关，温度?25?C，k?1.5倍。 细胞抗破碎系数a：a酵母=2.9，a大肠杆菌 = 2.1。 细胞种类：影响k值。 细胞浓度： Z：常数，p0：破碎所需的最低压力，?：细胞浓度的参数。 2.7 细胞破碎技术 阀门底座：刃缘阀座，平边阀座 优点 A、在大规模cell破碎中，高压匀浆机和珠磨机用得最多; B、高压匀浆机最适合于酵母和细菌; C、珠磨机可用于酵母和细菌，但对真菌菌丝和藻类更合适. 2.7 细胞破碎技术 4) 超声破碎法(15—25kHz) 2.7 细胞破碎技术 机理 在超声作用下产生的空穴化作用(cavitation)，空穴的形成和闭合产生极大的冲击波和剪切力。 优点：适合于多种细胞的破碎 缺点：A、影响因素多，如振幅、黏度、表面张力、液体体积和流速、探头材料和形状；B、超声产生超氧离子毒害作用；C、有效能量的利用率低；D、产热大，需控温；E、不易放大，仅应用于实验室规模的细胞破碎。 2.7 细胞破碎技术