免疫组织化学的基本理论与技术3.ppt

非特异性染色 ④ 一抗的使用浓度是否过高。 ⑤ 清洗是否充分。 应严格操作规程。因在缓冲液中含有一定量的盐，这亦有利于减低背景着色，通常 0.05mol/l Tris—HCl，0.15mol/l NaCl已适用于多数染色方法，溶液内加入吐温20，效果 更佳。特殊标记时，试剂公司一般都提供缓冲液的配方。 ⑥ DBA的使用是否正确。DAB的孵育时间、配制方式、DAB保存不妥、临用前加H2O2。 ⑦ 标本染色过程中是否曾经干涸，否则会造成边缘部的非特异性染色。 ⑧ 检查二抗与标本的内源性组织蛋白是否有交叉反应。 3 免疫组化结果分析选择着色均匀、背景很浅的高质量切片。 （1）阳性着色细胞计数法：（2）灰密度分析法：通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用图像分析仪进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。（3）评分法：通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0-3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1-4分为0-25%、26-50%、51-75%、76-100%），最终可以分数相加，再进行比较。准确判断阳性和阴性,排除假阳性和假阴性结果正确对照实验多次重复实验几种方法进行验证得到一张好的切片 * Discuss lack of focus in molecular pathol