同时检测CSFV、PRRSV地二重RT-PCR方法地建立及其在临床样品检测中地初步应用.pdfVIP

L|vEsTocKANDPoULTRy1lNDUSTRYNo．227 · 目前．猪群都是密集养殖，发病猪 场往往同时感染多种病原体【…。这给 同时检测CSFV、PRRSV的二重 疾病的诊断带来很大的困难。对于疾 病的诊断，要做到“早、快、严、小”，因 RT—PCR方法的建立及其在 此，建立一种快速、敏感、方便的诊断 临床样品检测中的初步应用 ．方法用于病原体的鉴别诊断是势在必 行。对于病毒性疾病，常规的诊断方法 岳丰雄1．2 崔尚金一 冉多良： 张超范- 周盛华1 戚亭1 主要是通过细胞培养进行病毒分离， (1．中国农种院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病 但是病毒分离需要花费大量的时间， 研究室，黑龙江 哈尔滨 150001；2．新疆农业大学) 同时需要专门的技术人员操作。而依 赖于琼脂糖凝胶电泳技术的PCR技 中图分类号：$851．3文献标识码：A 文章编号：1008—0414(2008)03—0032-04 术能够做到快速、准确的对病原体进 、 行检测．因此近年来得到快速的发展。 摘 要 建立了1种一步法RT—PCR用于同时检测典型猪瘟病毒(csvv)和猎繁 殖呼吸道综合征病毒(PRRSV)的多重PCR诊断方法(MultiplexPCR，mPCR)。根据多重PCR(mPCR)是在普通PCR的基 6．0’ Genbank上公布的CSFV、PRRSV基因组全序列及部分序列。借助DNAStar和Oligo础上加以改进．在一个PCR反应体系 基因序列和引物设计软件，设计2对特异性引物分别用于扩增C娲V、PRRSV病毒777 中加人多对特异性引物。针对多个 bp和434 bp的目的片断。该mPCR由RT反应和PCR反应构成。将病毒核酸连接到 DNA模板或同一模板的不同区域扩 PMDl8-T载体．提取质粒后。以10倍进行倍比稀释．取每个稀释度的病毒核酸进行 增多个目的片段的PCR技术161。mPCR mPCR反应。对CSFV、PRRSV的最低检测量分别为8．5pg、8．3xl(Y-2Pg。EIPCV2、PCVI、 保持了常规PCR技术特异性强、灵敏 PPV,PRV、SIV、E．coil和双蒸水为模板进行mPCR反应，扩增结果均为阴性，表明该