实验三逆境对植物细胞膜的伤害(电导法)2.pptVIP

实验三 不同植物离体叶片抗逆性比较;一、实验目的 1、认识植物在逆境或者其他损伤的情况下，细胞受伤害原理以及测量方法 2、掌握电导率的测定方法 3、学会运用统计学方法，对不同植物在冷害后其细胞损伤程度进行比较和分析。 ;二、实验原理 植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。细胞膜不仅是分隔细胞质和胞外环境的屏障，而且也是细胞与环境发生物质交换的主要通道，又是细胞感受环境变化刺激的部位。 细胞膜的选择透性是其维持生理功能的最重要的条件之一。;各种逆境伤害都会造成质膜选择透性的改变或丧失，例如低温、冰冻、干旱脱水等导致的细胞膜机械损伤以及逆境和衰老过程中的膜脂过氧化作用，都可以增大细胞膜通透性。因此，细胞质膜透性的测定常作为植物抗性研究中的一个重要生理指标。; 当质膜的选择透性因逆境伤害而明显改变或丧失时，细胞内的物质(尤其是电解质)大量外渗，从而引起组织浸泡液的电导率发生变化，通过测定外渗液电导率的变化，就可反映出质膜的伤害程度和所测材料抗逆性的大小。 膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。 ; 因此，比较不同植物或同一植物不同品种在相同胁迫温度下膜透性的增大程度，即可比较植物间或品种间的抗逆性强弱。 ;电导仪;电导仪的用法;电导率：0.00ＵS/cm-100mS/cm TDS:溶解性总固体, 衡量水中所有离子的总含量（ppm) 0.00mg/L-1000mg/L 温度： 0－99.9度;三、 实验材料 1、材料处理 采集所研究植物的茎叶4－8枝（10cm左右），分别做如下处理（用纸分包，并写好标鉴)。 （1）对照（无寒冷处理） （2）4度寒冷处理30min （3）0度寒冷处理30min （3）－20度冷害处理30min 2、仪器和药品：双蒸水、 水浴锅、电导仪 各组需要：电炉1台、塑料杯12个、大小烧杯各2 只、试管12支，试管夹2－3个 ;四、实验方法 （浸泡法） 1、取材 每处理取大小相当的植物叶片若干片(尽量保证叶片的完整性，少含茎节)，用自来水洗净后再用蒸馏水冲洗3次，用滤纸吸干表面水分，将叶片剪成小片 (避开主???)； 每种处理下快速称取鲜样3份（三个重复），每份0．1 g，分别置于10 m1去离子水的试管中，用玻棒搅动。使样品浸入水中。盖上盖子置于室温下浸泡处理12 h。（每1 植物有4个处理，3 个重复，共12个试管）。贴上标鉴。 ;2、电导率的测定 （1）先测量空白电导率（蒸溜水的电导） （2）用电导仪测定浸泡后的浸提液电导(S1)； （3）然后用沸水浴加热1Omin，冷却至室温后摇匀，再次测定煮沸后浸提液电导(S2)。 ;五．计算 按下式计算相对电导率值： 相对电导率（L）= （S1-空白电导率）/（S2-空白电导率） S1:煮前的电导率 S2:煮后的电导率 空白电导率:蒸馏水的电导率 单位：us/cm ; 由于室温对照也有少量电解质外渗，故按下式计算由于低温或高温胁迫而产生的外渗，称为伤害度（或伤害性外渗）。 伤害度（%）= 式中 Lt— 处理叶片的相对电导度； Lck—对照叶片的相对电导度。 ;;[ 注意事项 ] 1. 整个过程中，叶片接触的用具必须绝对洁净（全部器皿要洗净），也不要用手直接接触叶片，以免污染。 2. 测定前电极要用双蒸水清洗，用后电极要用蒸溜水清洗干净。（不能用其它药品清洗） ;;