肺结核的新诊断技术.pptVIP

* Cepheid (American) * Current price: 17.000 USD for the machine 20 USD / cartridge Only 4 samples at a time. 新诊断技术及其在NTP中的应用 江苏省结核病参比实验室 NTP中现行实验室技术 涂片：萋尼染色显微镜检 培养：固体培养基：简单法、离心法 药敏：固体培养基：绝对浓度法、比例法 菌种鉴定：鉴别培养基＋生化试验 传统实验室技术不能适应不断深入的结核病防治工作的需要 实验室新诊断技术总览 细菌学检测方法 发光二极管荧光显微镜（LED） 液体培养 分子生物学检测方法 Genexpert HAIN Genechip 免疫学检测方法 ELISOPTTSPOT 和Quantiferon 血清学诊断方法 荧光 比色 (MIGIT) (MB Bact Alert) Ruthenium complex CO2 pH 液体培养 BACTEC TB460 原理：标本经前处理接种至含有14C-棕榈酸的12B培养基，37C培养。分枝杆菌分解14C-棕榈酸，产生14CO2，BACTEC TB460仪自动检测，14CO2含量，并换算成生长指数（GI）。 优点： 快速：将分离培养的阳性检出时间由常规培养所需的2-8周缩短至3-14天，将药敏试验的报告时间由常规方法的4周缩短至1周。 操作简便、灵敏度高，可进一步做药敏试验、菌种初步鉴定。 缺点： 放射性同位素污染。 仪器与试剂价格昂贵。 未实现全自动化 污染率高 原理：是BACTEC TB460的换代产品。标本经前处理后接种到系统配套的液体培养基，该培养基中包被有对氧浓度敏感的荧光物质，当细菌生长代谢消耗培养基中的氧时，氧浓度降低，荧光被激发，系统可以连续检测荧光水平，自动报告结果。 优点： 系统进一步优化，操作更简便、自动化更强。 解决了BACTEC TB460的同位素污染问题。 24小时连续检测，有利于早期报告阳性结果。 缺点： 仪器与试剂价格更昂贵。 未能解决高污染率的问题 BACTEC MGIT 960 分枝杆菌生长指示管 液体培养 1Cruciani M, et al. JCM 2004; 42:2321-2325 2 Mean of 14 studies in MGIT960 = 10.7% (2.0-30.0) [ ] = acceptable range 培养方法 敏感性 (95% CI) 结果报告周期 污染 (%) 涂阳 涂阴 罗氏培养 0.76 (0.73-0.79) 22.3 33.7 [3 – 5] MGIT960 0.88 (0.84-0.91) 11.7 16.5 13.8-16.6 210.7(2.0-30.0) [5 – 10] MGIT + 罗氏 0.92 (0.87-0.95) MGIT 7 ml MGIT 7 ml MGIT 7 ml MGIT 7 ml MGIT 7 ml MGIT 7 ml MGIT 7 ml + S MGIT 7 ml + I MGIT 7 ml + R MGIT 7 ml + E GC S I R E 0,8 ml BACTEC MGIT SIRE 补充剂 每种药物0,1 ml 转移 0,5 ml 阳性 MGIT 培养物 0,1 ml 阳性 MGIT 培养物 9,9 ml 蒸馏水 转移 0,5 ml 插入BACTEC MGIT 960 BACTEC MGIT 960 TB – 药敏试验 S.I.R.E. LED显微镜 发光二级管 (LED) 技术 提供价廉、稳定的光源 寿命 150,000 h 反复开关不影响寿命 不释放有毒气体 不需要暗室 操作人员工作负荷减轻 快速药敏-商业化线性探针检测（LPAs） GenoType ? MTBDRplus, HAIN 检测结核分枝杆菌复合群以及利福平、异烟肼耐药相关的突变 检测XDR的试剂盒也已经发布 INNO-Lipa Rif TB 检测结核分枝杆菌复合群以及于利福平耐药相关的突变 大多数利福平耐药的菌株同时也耐异烟肼 WHO 鼓励使用的工具 可使用涂阳痰标本和培养物进行操作 快速、简便易用，仅需基本PCR技术 然而，价格比较昂贵，且不能检测造成耐药突变的热点区域外的突变 * MTBDRplus 操作流程 DNA提取 用NALC/NaOH 处理痰标本 2) PCR扩增 3) 杂交 扩增产物和 固化在 膜上的特异性探针杂交 4) 结果判读 rpoB 野生型探针: WT1 - WT8 rpoB 突变探针: MUT1-3: D516V, H526Y,