第一节DNA重组的基本操作工具.pptVIP

DNA重组技术的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性核酸内切酶（又称限制酶） DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——基因进入受体细胞的载体 思考与探究 P7 （2） 为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 1、含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列； 2：通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 课本知识回顾 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加 以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 基础上进行过 的 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 随堂练习： 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 2. （多选）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 * * * * * * 1.1 DNA重组技术的基本工具 一、基因工程的概念 1、原理： 2、操作水平： 3、又称： 4、优点： 基因重组 DNA分子水平 DNA重组技术或基因拼接技术 定向改造生物性状 　　基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具： 来源： 种类： 作用： 作用结果： 1.限制性内切酶——“分子手术刀” 限制性核酸内切酶能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并在使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要从原核生物中分离纯化出来 约4000种 黏性末端 平末端 1.双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列 A T G G C A T C T T C G A A 1 2 3 4 2.特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A G A A T T C C T T A A G 中轴线 C T T A A G A A T T C G C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C 黏性末端 平末端 在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。 ？末端如何书写？ 原核生物很容易受到自然界中外源DNA的入侵， 但是长期的进化过程中，这些原核生物却没有因为 外源DNA的入侵而灭绝。 根据我们刚刚掌握的知识，你能推测这其中的 原因吗？ 原核生物细胞中的限制酶会将外源DNA切割掉，使之 失效，以保证自身的安全，但是不会切割自身的DNA， 这是原核生物在长期进化过程中形成的一套防御机制。 2、 DNA连接酶——“分子缝合针” 作用——双链DNA片段“缝合起来”，回复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 G A A T T C C T T A A G 即脱氧核糖、磷酸基之间的连接 G P A P DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ DNA连接酶 DN