实验一实验准备和细菌培养.pptxVIP

基因工程原理与方法;1）概述;实验一　 碱裂解法抽提质粒DNA 实验二　 质粒DNA的电泳检测 实验三　 质粒DNA的浓度测定和酶切 实验四　 酶切产物的电泳和目的片段的回收 实验五　 DNA的体外连接 实验六　 重组DNA的转化 实验七　 重组转化子的快速鉴定 实验八　 多聚酶链式反应（PCR） 实验九　 植物基因组DNA的提取 实验十　 基因组DNA的Southern杂交分析;微型离心管（eppendorf管）;吸头;移液器的使用;1、如长时间不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧； 2、定期清洁移液器外壁，可以用95%乙醇或60%的异丙醇，再用蒸馏水擦拭，自然晾干； 3、使用时要检查是否有漏液现象：方法是吸取液体后悬空垂直放置15秒，看看液面是否下降。如果漏液，则检查吸液嘴是否匹配和弹簧活塞是否正常； 4、当移液器吸嘴内有液体时，严禁将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞； 5、使用正确的方法安装吸头，切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装。;移液器的检测和校准;标准容量 最大允许误差 5 μl ± 0.3 μl 10 μl ± 0.3 μl 20 μl ± 0.4 μl 100 μl ± 1.5 μl 200 μl ± 2 μl 500 μl ± 5 μl 1000 μl ±10 μl 5000 μl ±50 μl;超净工作台的使用;大肠杆菌的液体培养和固体培养;LB培养基：一般被解释为Luria-Bertani培养基，这个名字来源於英语的lysogeny broth，即溶菌肉汤。生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增，达到使用要求。;菌种活化：甘油法保存的含有质粒的菌种;划板后标识清楚，于37度恒温箱中将培养皿倒置培养过夜，待菌落长至合适大小时倒置放入4度冰箱保存（可放置一个月左右）。;培养皿上标识一般写底部边缘。;含质粒的大肠杆菌菌种的保存;细菌培养注意事项;细菌生长的典型曲线 (Ⅰ.延迟期， Ⅱ.对数期， Ⅲ.稳定期， Ⅳ.衰亡期);(1) 延迟期：少量细菌接种到新鲜培养基后，一般不立即进行繁殖，生长速度近于零。因此在开始一段时间，细??数几乎保持不变，甚至稍有减少。这段时间被称为延迟期，又称为迟缓期、调整期或滞留适应期。处于延迟期细菌细胞的特点是分裂迟缓、代谢活跃。延迟期的长短与菌种、种龄、接种量和培养基成分有关。 (2) 对数期：对数期又称指数期。这一阶段突出特点是细菌数以几何级数增加，代时稳定，细菌数目的增加与原生质总量的增加，与菌液混浊度的增加均呈正相关性。 (3) 稳定期：又称恒定期或最高生长期。处于稳定期的微生物，新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等，整个培养物中二者处于动态平衡，此时生长速度又逐渐趋向零。稳定期的细胞内开始积累贮藏物，如肝糖、异染颗粒、脂肪粒等，大多数芽孢细菌也在此阶段形成芽孢。如果为了获得大量菌体，就应在此阶段收获，因这时细胞总数最高；这一时期也是发酵过程积累代谢产物的重要阶段，某些放线菌抗生素的大量形成也在此时期。 (4) 衰亡期：稳定期后如再继续培养，细菌死亡率逐渐增加，以致死亡数大大超过新生数，群体中活菌数目急剧下降，出现了“负生长”，此阶段叫衰亡期。;分光光度计法测定大肠杆菌液体培养物的OD600值;21;2，?完成检测后合上滑盖，关闭电源。?;23;24