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实验八甲醛滴定法测定氨基氮课件
实验八 甲醛滴定法测定氨基氮 一、 目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点 二、 原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中存在如下平衡： 如果样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量；如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定值也增加；滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。 三、器材与试剂 25mL锥形瓶 微量滴定管 0.1mol/L甘氨酸标准溶液 0.1mol/L 标准NaOH溶液 酚酞指示剂： 四、操作步骤 1、中性甲醛溶液的配制： 量取50mL 36-37%甲醛溶液于锥形瓶中，加入1mL的0.1%酚酞乙醇水溶液，用0.1mol/L的NaOH溶液滴定到微红，储存于密闭的玻璃瓶中。此试剂临用前配制。 2、甘氨酸的滴定 取6个锥形瓶，编号，按下表加入试剂： 分别用0.1mol /L 的NaOH标准溶液滴定至微红，并记录NaOH消耗体积。 五、结果计算 甘氨酸氨基氮回收率（%）=实际测得量/加入理论量×100% =（V标准-V空白）/2×100% 氨基氮（mg/mL）=（V未-V空白）×0.1×14.008/2 注意 1、标准NaOH溶液应在使用前标定，并保存于密闭瓶中。不可使用隔日贮存在微量滴定管中的剩余NaOH。 2、本实验为定量实验，甘氨酸和NaOH的浓度要严格标定，加量要准确。 * * -NH3+是弱酸，完全解离时pH为11-12或更高，若用碱滴定-NH3+所释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促进H+释放使溶液酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内（pH9.0左右）。因此可用酚酞做指示剂，用标准NaOH溶液滴定。 2 2 2 2 2 2 甲醛（mL） 5 5 5 5 5 5 酚酞（滴） 5 5 7 7 5 5 水（mL） 2 2 0 0 0 0 未知浓度甘氨酸溶液（mL） 0 0 0 0 2 2 0.1mol/L标准甘氨酸溶液(mL) 6 5 4 3 2 1 瓶号 *
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