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Brdu或H2BGFP检测细胞增殖技术
Brdu,
中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗Brdu单克隆抗体,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500
??
BrdU需要DNA变性后才能与抗体结合
,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。而BrdU需要变性DNA后才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构,影响了Hochest等染色,导致染色弥散,准确性降低等问题(图2),逐渐被EdU取代。细胞增殖周期包括G1、S、G2、M 4个时期,其中S期是DNA合成期,细胞内DNA进行半保留复制,各种构成DNA的原料掺入到DNA中。
????BrdU作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物(其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C原子连接的甲基被溴代替),像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中。当细胞处于DNA合成期而同时又有BrdU存在时, 就会有BrdU掺入新合成的DNA中,只要细胞不消亡,这种BrdU就在胞核的DNA中长期存留。掺入到DNA的BrdU可通过抗BrdU单克隆抗体在组织切片或细胞爬片上显示。
????该方法能对细胞周期进行迅速而稳定的测量, 而且标记BrdU的细胞只要不受到紫外线照射,对细胞本身没有功能损害。
????该技术可应用到跟踪检测移植细胞的存活、分化和功能状态。
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