脂肽类抗生素fengycin在枯草芽胞杆菌NCD-2菌株抑制番茄灰霉病菌中功能分析.pdfVIP

植物病理学报 ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４３(４):４０１￣４１０(２０１３) 脂肽类抗生素ｆｅｎｇｙｃｉｎ在枯草芽胞杆菌 ＮＣＤ￣２ 菌株抑制番茄灰霉病菌中的功能分析 董伟欣ꎬ 李宝庆ꎬ 李社增ꎬ 鹿秀云ꎬ 马 平ꎬ 郭庆港∗ (河北省农林科学院植物保护研究所ꎬ河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心ꎬ 农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室ꎬ 保定０７１０００) 摘要:枯草芽胞杆菌ＮＣＤ￣２菌株及其无细胞发酵液对多种植物病原真菌具有较强的拮抗活性ꎮ 为了明确ＮＣＤ￣２菌株抑菌 作用机理ꎬ本研究利用快速蛋白液相色谱技术(ＦＰＬＣ)结合抑菌活性测定ꎬ对ＮＣＤ￣２ 菌株的脂肽类抑菌物质进行分离、纯 化ꎬ经质谱鉴定ꎬ该抑菌物质为芬荠素(ｆｅｎｇｙｃｉｎ)ꎮ 从ＮＣＤ￣２ 菌株中克隆出ｆｅｎｇｙｃｉｎ合成酶基因ｆｅｎＣ及其上游启动子序 列ꎬ通过同源重组技术对ｆｅｎＣ基因进行了内缺失突变ꎬ同ＮＣＤ￣２野生型菌株相比ꎬｆｅｎＣ基因缺失突变子丧失了ｆｅｎｇｙｃｉｎ 的 合成能力ꎬ同时该突变子显著降低了对番茄灰霉病菌的拮抗活性ꎮ 进一步在离体叶片上比较了ＮＣＤ￣２野生型菌株和突变 子之间脂肽提取物和菌体细胞对番茄灰霉病的保护作用ꎬ结果发现ꎬ突变子不论是脂肽提取物还是菌体细胞显著降低了对 番茄灰霉病的防治作用ꎮ 关键词:枯草芽胞杆菌ꎻ番茄灰霉病菌ꎻｆｅｎｇｙｃｉｎꎻ突变 Ｔｈｅ ｆｅｎｇｙｃｉｎｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓａｒｅ ｍａｊｏｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎｔｈｅ ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓｓｔｒａｉｎＮＣＤ￣ ２ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ　 ＤＯＮＧ Ｗｅｉ￣ｘｉｎꎬ ＬＩ Ｂａｏ￣ｑｉｎｇꎬ ＬＩ Ｓｈｅ￣ｚｅｎｇꎬ ＬＵ Ｘｉｕ￣ｙｕｎꎬＭＡＰｉｎｇꎬＧＵＯＱｉｎｇ￣ｇａｎｇ　 (ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ꎬＨｅｂｅｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅｓꎻ ＩＰＭ Ｃｅｎｔｒｅ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ ＰｒｏｖｉｎｃｅꎻＫｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ＩＰＭ ｏｎ Ｃｒｏｐｓ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ ＣｈｉｎａꎬＭｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｂａｏｄｉｎｇ０７１０００ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｔｒａｉｎ ＮＣＤ￣２ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｅｌｌ￣ｆｒｅｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｓｈｏｗｅｄ ｓｔｒｏｎｇ ｉｎｈｉｂｉｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈｏｆｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｓ. ＴｈｅＮＣＤ￣２ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｅｘｔｒａｃｔｓｓｈｏｗｅｄａ ｓｔｒｏｎｇｉｎｈｉｂｉｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆＢｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ. Ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓｂｙ Ｆａｓｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ (ＦＰＬＣ)ꎬａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓｆｅｎｇｙｃｉｎｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｍａｔｒｉｘａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ/ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ￣ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｉｇｈｔ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ (ＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ). Ｔｈｅ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｆｅｎｇｙ￣ ｃｉｎ ｗａｓ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｉｎ￣ｆｒａｍｅｌｅｓｓ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｔ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｆｅｎｇｙｃｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ. Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏｔｈｅ ｓｔｒａｉｎＮＣＤ￣２ｗｉｌｄｔｙｐｅꎬｔｈｅｆｅｎｇｙｃｉｎ￣ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｍｕｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｎｔｉｆｕｎ￣ ｇａｌ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ. Ｆｕｒｔｈｅｒ ｂｉｏａｓｓａｙ ｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅ ｆｅｎｇｙｃｉｎ￣ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｔａｎｔ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｌｏｓｔ ｔｈ