Western Blot详细优化步骤.pdfVIP

WesternBlotting 详细步骤： 一、SDS 1清洗玻璃板： 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗涤剂轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏 水冲洗干净后立在筐里晾干。用前用酒精干燥。 2灌胶与上样 ： (1)、玻璃板对齐，放好胶条，然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃对齐，以 免漏胶。） (2)、配分离胶： 加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用枪吸取胶沿玻璃注入，待胶面升到中间线 偏高时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。（灌胶时开始可快一些，胶面快到 所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加水液封 时要很慢，否则胶会被冲变型。） (3)、当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了（约30min）。胶充分凝固就可倒去胶上 层水并用吸水纸将水吸干。 (4)、配5％的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳 子插入浓缩胶中。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保 持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小，从而使加样孔的上样体积减小，所以在浓缩胶凝固 的过程中要经常在两边补胶。待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将 其拔出。 (5)、去