第6章 ELISA实验.pptVIP

主要试剂 抗原：卵白蛋白溶液20ug/ml(以包被缓冲液稀释) 待检血清：兔抗卵白蛋白（以封闭液倍比稀释） 酶标抗体：酶标羊抗兔IgG(1:1000封闭液稀释) 包被缓冲液：pH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液 洗涤液：pH7.4 PBS-0.05%Tween20缓冲液 封闭液：0.1%明胶PBS-0.05%Tween20缓冲液 底物溶解液：pH5.0磷酸-枸橼酸盐缓冲液 底物液：0.04%邻苯二胺(OPD),临用前加30%H2O2 150ul/100ml 终止液：2MH2SO4 实验步骤 待检血清的稀释： 第一孔：0.3ml待检血清+2.7ml稀释液 第2-8孔： 0.3ml前管混合血清+2.7ml稀释液 血清浓度： 1:10—1:108 实验步骤 3.2.4　结合物的保存 酶和抗体均为生物活性物质，易失活。高浓度较为稳定，冻干后可在普通冰箱中保存一年左右。结合物溶液中加入等体积的甘油，加入蛋白保护剂。另外再加入抗生素（例如庆大霉素）和防腐剂（HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠）。 3.2.5 　结合物的稀释液 用于稀释高浓度的结合物以配成工作液。为避免结合物在反应中直接吸附在固相载体上：0.1%牛血清白蛋白， 0.05%吐温20 。试剂盒均已用合适的缓冲液配成工作液，使用时不需再行稀释，在4-8℃保存期可达6个月。 试剂准备 C 酶的底物 3.3