槲皮素铜(Ⅱ)配合物清除自由基活性的研究.docVIP

槲皮素铜()配合物清除自由基活性的研究 【摘要】 目的 研究 槲皮素铜()配合物的抗氧化作用。 方法 采用DPPH法和NBT法分别测定了槲皮素铜()配合物对二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）和超氧阴离子（O2-·）的清除作用。结果槲皮素铜()配合物能有效清除DPPH·和O2-·，其清除能力均强于单独的槲皮素。结论 槲皮素铜()配合物是一种较强的自由基清除剂，具有较高的SOD活性。 【关键词】 槲皮素； 铜()配合物； 自由基； 抗氧化作用 　　Abstract：ObjectiveTo investigate the antioxidant properties of quercetin-Cu(II) complexes. Methods The antioxidant properties of quercetinCu(Ⅱ) complexes were evaluated by the DPPH· radical and superoxide scavenging activities. ResultsThe quercetinCu(Ⅱ) complexes showed strong antioxidant activities, and both its DPPH scavenging activity and superoxide anion radical-scavenging activity were better than those of quercetin alone. ConclusionThe quercetin-Cu(Ⅱ) complexes acts as a strong radical scavenger and has high SODlike activities. 　　Key words：Quercetin； Cupric complexes； Free radical； Antioxidation 槲皮素（quercetin,3,5,7,3’,4’-五羟基黄酮Que）广泛存在于植物界，大约68%的植物中都含有。槲皮素药理作用广泛，具有降血压、降血脂、扩张冠状动脉、抗血小板聚集、抗炎、抗过敏、抗氧自由基和抗心律失常等多种生物活性及药理作用［1～3］。根据中药配位化学原理，中药有机成分与微量元素结合后往往会提高其生物活性或产生新的生物活性［4］。槲皮素对金属离子具有强烈的螯合作用，生成的配合物往往具有较强的荧光，所以槲皮素常用于金属离子的荧光 分析 ［5，6］。近来研究表明槲皮素与Fe，Pb，Cd等金属离子形成配合物后生物活性和药理作用明显增强［7，8］，这对天然药物的开发利用开辟了新的途径。本文研究了槲皮素铜配合物清除DPPH·自由基和超氧阴离子（O2-·）的作用，初步探讨了配合物与O2-·的反应机理。 　　1 材料与方法 　　1.1 试剂与仪器 　　二苯代苦味肼基自由基（DPPH）、黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、氯化硝基四唑氮蓝（NBT）均为Sigma产品。槲皮素（Quecetin）购于成都超人植化有限公司（BR）。槲皮素铜配合物按 文献 ［9］提供的方法合成，所有其它试剂均为分析纯。 　　756MC型紫外可见分光光度计，石英比色皿。 　　1.2 体外清除DPPH·自由基的作用DPPH用无水乙醇配制成0.65 mmol/L的溶液，临用时稀释。DPPH溶液的浓度在0.01 mmol/L～0.08 mmol/L范围内与其在517 nm处的吸光度线性相关，其线性回归方程为：A = 0.1337CDPPH - 0.009 1，r2=0.998 1。 样品溶液用11（v/v）的DMF-乙醇溶液配制，在1.9 ml 0.065mM的DPPH溶液中加入0.1 ml不同浓度的样品溶液。于室温下反应30 min，在517 nm下测定吸光度Ai。以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为Amax，相应样品溶液的吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。DPPH自由基的清除活性按下式 计算 ：DPPH·Scavenging(%)=(1-Ai-A0Amax)×100%半数清除浓度（EC50）根据实验结果计算。 　　1.3 体外清除超氧阴离子（O2-·）的作用0.1 ml样品溶液加到含有0.4 mmol/L黄嘌呤、0.24 mmol/L NBT的pH=8.0的0.1 mol/L磷酸盐缓冲体系中，然后再加入黄嘌呤氧化酶溶液1 ml混合均匀。反应混合物在37水浴中反应20 min。然后加入2 ml 69 mmol/L的十二烷基苯磺酸钠（SDS）溶液终止反应，在560 nm下测其吸光度Ai，以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。O2-·清除活性按下式计算： O2