汉族人群PIP3-E基因多态性与精神分裂症关系_0.docVIP

汉族人群PIP3-E基因多态性与精神分裂症关系 【摘要】 目的 探讨 中国 北方汉族人群PIP3-E基因多态性与精神分裂症的关系。 方法 采用PCR和限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)方法，在102个精神分裂症患者核心家系中检测PIP3-E基因上的4个单核苷酸多态性(SNPs)，对结果进行传递不平衡检验(TDT)和单倍体相对风险(HRR) 分析 ，并进行SNP与临床症状的关联性分析。结果 PIP3-E基因上的4个SNP基因型在患者组和父母组的频数分布均符合Hardy-WEinberg平衡；TDT分析结果表明，杂合子父母双亲传递给患病子女的不同等位基因均未偏离50%（P005）；HRR分析结果表明，各位点等位基因在病例组和对照组中的频数分布差异均无统计学意义（P005）；rs2236257位点等位基因与关系妄想、自责自罪妄想以及思维连贯性障碍3种临床症状相关联，其基因型与关系妄想、自责自罪妄想相关联(P005)。结论 PIP3-E基因可能不是精神分裂症的易感基因。 【关键词】 精神分裂症 　　精神分裂症是一种最常见的病因未明的精神疾病，具有明显的遗传倾向，遗传因素在其发病过程中起主导作用，但其遗传机制 目前 尚未完全阐明〔1〕。定位和克隆精神分裂症易感基因，不仅有助于阐明其分子遗传学机制，同时也为临床基因诊断、基因 治疗 和药物设计奠定基础。因此，易感基因的 研究 一直是精神分裂症病因学研究的重点。其中，生长因子基因及与其相关的细胞信号传导通路已经成为精神分裂症易感基因研究的热点。PI3K/PKB(Akt)信号传导通路在精神分裂症的发生 发展 中起着重要的作用，其活性的减退很可能是精神分裂症发生的病理生 理学 机制之一〔2〕。第二信使PIP3是该信号传导通路上至关重要的分子〔3〕。本研究旨在探讨6号染色体长臂2区5带上编码PIP3的PIP3-E基因多态性与精神分裂症的关系。 　　1 对象与方法 　　11 对象 2000～2005年吉林省四平市精神病 医院 和长春市凯旋医院经临床诊断(符合国际疾病分类标准第10版精神分裂症诊断标准，ICD-10)，参照《中国精神病分类与诊断标准方案》（第2版）修订本精神分裂症诊断标准(CCMD-2-R)确诊为精神分裂症的患者。共102个核心家系(患者及其健康父母)，均为中国北方汉族人。患者中男性72人，女性30人，平均年龄为(2561±658)岁。在获得知情同意后取外周静脉血5ml（肝素抗凝），-20保存至提取基因组DNA。 　　12 引物设计 采用 计算 机国际互联网(http//wwwncbinlmnihgov/SNP)，在人类基因组库中对PIP3-E基因上的SNPs进行检索，选出4个SNPs，根据引物设计原则设计4对特异性引物。序列如下：SNP1：F:5′AGAACTCACAGAAGCAGCCCTA3′，R:5′GCAGGGTTTGTGAATAGCTTTG3′；SNP2：F:5′GGAAGCTGGAAAATGACCTAAA3′，R:5′GGCATTTATTTGTTCAGCCTTC3′；SNP3：F:5′CTGGCCC　AGCTACAATAATTT-3′，R:5′TGTTAACACCTAATGGGC　TGA3′；SNP4：F:5′TGACTATCTGAATCAGCCGAAA3′，R:5′CCAGCAGTGTTTGAGAATGACT3′。 　　13 人外周血白细胞基因组DNA的提取 采用Promega液体纯化提取DNA试剂盒(美国Promega公司)，严格按照说明书方法与步骤提取外周血白细胞中的基因组DNA。 　　14 基因型检测 用PCR-RFLP方法进行基因型检测。PCR反应体系为25μl，含有H2O(二馏灭菌水)186μl；10×Buffer 25μl；dNTP(10mmol/ml)07μl；Primer：F(30pmol/μl)025μl，R(30pmol/μl)025μl；Taq E(5U/μl)07μl；DNA(20～30ng/μl)2μl。PCR反应条件：95、5min，94、45s，62、55s，72、40s，5个循环；94、45s，61、55s，72、40s，5个循环；94、45s，60、55s，72、40s，30个循环;72延伸10min。限制性酶切PCR扩增产物： 应用 HindIII，HaEIII，BglII和ApaI限制性内切酶分别对SNP1,SNP2,SNP3和SNP4的PCR产物进行酶切，在37 恒温箱中闭盖进行酶切4h。酶切产物用25%琼脂糖凝胶，90V电压电泳50min，溴化乙锭染色，应用Jel Doc2001型凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司)观察酶切产物，并根据产物片断大小确定基因型，即切开纯合型（1/1）、未切开纯合型（