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肝炎病毒Hepatitis viruses 肝炎病毒 概念：不是病毒学分类上的名称，指专门引起肝炎的一组病毒。 类型：包括，公认的5种肝炎病毒和人类肝炎相关病毒（hepatitis F virus、 hepatitis G virus、 transfusion transmitted virus TTV） 基因组 HAV基因结构：RNA长度为7478bp，由1个5`非编码区、仅含有1个开放读框（ORF）的编码区和1个3`非编码区组成。 基因组功能： 1. 5`NCR区是HAV基因组的起始区，占整个基因的1/10，具有高度有序的结构。 2. P1区：病毒衣壳蛋白编码区，可分A、B、C、D4个区域。 3.P2区：编码3种蛋白，是肝病毒特有蛋白。 4. P3区：A蛋白中21个疏水氨基酸残基锚定细胞膜。B蛋白与5`NCR结合，启动病毒复制。C蛋白将HAV编码蛋白剪切加工成为具有功能的结构和非结构蛋白。 微生物检 1．标本采集：采用标准的血清分离和保存方法，抗HAV抗体检测；检测粪便HAV抗原时，在发病前2周或出现症状数天内采集标本。肝活检、唾液、胆汁可用于检测。 2. 检测方法： 电镜检测标本病毒颗粒在临床上不实用，最初采用免疫电镜发现HAV。将发病早期粪便上清液，与特异性抗体作用，观察形成的免疫聚集物。敏感性大约为106个病毒／ml。 2．检测标本抗原 HAV只有一个抗原型， 采用ELISA检测，先用抗HAV抗体包被 ELISA板微孔，然后加入待测标本,HAV 抗原与固相表面抗HAV抗体结合。再加 入酶标记的抗HAV抗体，底物显色后测 定吸光度判断是否存在HAV抗原。能检 测到lng的HAV蛋白。 3．检测标本核酸 (1)分子杂交法检测：从标本中提取HAVRNA，用 同位素标记HAV基因片段作为探针，进行杂 交检测。比ELISA检测更敏感，大约高出4— 10倍。 (2)RT-PCR检测：采用RT-PCR检测HAV核酸，敏 感性更高；从标本中提取HAVRNA，然后逆转 录成cDNA，用PCR扩增。PCR产物经琼脂糖凝 胶电泳后,进行溴化乙锭染色检测。 4.抗体检测 1)检测单份血清抗HAV-IgM：患者就 诊时就可检出抗HAV-IgM，因此检 测单份血清抗HAV-IgM是最为可靠 的方法。 常用IgM抗体捕捉ELISA检测，其敏感性和特 异性高。原理是用抗人IgM重链包被微孔使 之固相化。能捕捉IgM抗体，抗HAV-IgM与加 入的HAV抗原及其IgG抗体和辣相氧化物酶的 结合物(抗HAVIgG-HRP)顺序结合，在反应孔 表面形成抗HAVIgM-HAVAg-抗 HAVIgG-HRP的免疫复合物，并使底物／显色 剂系统显色。 2)检测抗HAV lgG或者抗HAV总抗体：采集患者双份血清，采用ELISA方法检测抗HAV IgG或者总抗体。如果特异性抗体的效价有明显升高，表明期HAV感染。由于大多数患者在就诊时已经产生高效价的抗HAV抗体，因此应用上有限。双份血清检出抗HAV抗体，仅能提示是既往感染。 五、微生物检验 1.标本的采集 临床通过检查血液标本中的HBV标志物或HBV DNA对乙肝患者作出病原诊断。血清学标志物相当稳定,血液标本无需特殊处理。用于分析HBV核酸的标本，应于采集后6h内处理标本，并在24h内检测，其抗凝剂应为枸橼酸盐或 EDTA。 在5天内测定血清标志物，应在采血后24h内分离血清，将其保存于2-8℃。 2.标本的直接检查，目前主要依靠免疫学清学检查。 (1)HBsAg和抗HBs HBsAg阳性表示存在HBV感染。在感染后4-7周，血清ALT升高数周开始出现。在血清中的存在时间不超过6个月。如果HBsAg持续存在6个月以上，一般认为处于携带状态，机体清除病毒的可能性很低。在HBsAg从血清消失后发生抗HBs血清阳转。抗HBs是一种中和抗体，表明病毒基本清除，是痊愈的重要标志。也是疫苗免疫成功的标志。 核心窗口期：从HBsAg消失到抗HBs出现的这段间隔期。 (2)HBeAg和抗·HBe HBeAg是HBV复制的指标之一，在潜伏期与HBsAg同时或在HBsAg出现稍后数天可在血清中出现。持续存在时间不超过10周，如超过10周则提示感染转为慢性化。抗-HBe出现于HBeAg阴转后，其出现比抗HBs晚,但消失较早。HBeAg阴转表示病毒复制水平降低，传染性下降，病变趋于静止。 Pre-C区基因变异可产生HBeAg阴性的HBV感染，抗HBe可呈阳性，病毒仍复制活跃，病变可持续进展。 (3)HBcAg和抗HBc： HBcAg是HBV的核心部分，是HBV存在和复制活跃的直接指标之一。 HBcAg