细胞器的分离、纯化实验.pptVIP

细胞器的分离、纯化 — 细胞分级分离法;实验目的;应用范围： 1.病毒及亚细胞 组份分离 2.蛋白梯度分离 3.脂蛋白分离 4.RNA梯度沉淀 5.质粒DNA提纯 ;认识离心机及学习离心机的使用方法 学习细胞器的分离及纯化的一般原理和方法;实验原理;相对离心力（RCF） 由于转头有不同的制造商制造，半径不同，故用相对离心力来表示离心力的大小。 RCF (×g) = Fc/F重力 = mG/mg = r·ω2/g = 1.119×10-5·N2·r =11.2r(N/1000)2 也有： 根据这个公式，相对离心力（RCF）和每分钟转数（N）之间便可以互换，这种互换关系是很有实用价值的。;实验用品;台式高、超速离心机 0.6-10万rpm;离心机一般由离心机主机，转头，离心管三部分组成。 ;一般制备离心;?高速冰冻离心机; 从低速到高速逐级沉淀分离，使较大的颗粒先在较低转速中沉淀，再用较高转速将原先悬浮在上清液中的较小颗粒分离沉淀下来，从而使各种亚细胞组分得以分离。 差速离心法主要用于分离细胞器和病毒。 其优点是：操作简单，离心后用倾倒法即可将上清夜与沉淀分开，并可使用容量较大的角式转子。 缺点是：①分离效果差，不能一次得到纯颗粒；②壁效应严重，特别是当颗粒很大