过表达人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAA1456抑制H08910PM细胞增殖.pdfVIP

细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2016，32(9 1l83 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2016)09—1183—05 过表达人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAAI456抑制HO6910PM细胞增殖 陈怀梅 ，王佳 ，张应凤，高燕洪 (重庆医科大学附属大学城医院妇产科，重庆401331) [摘 要] 目的 研究人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAA1456的高表达对HO8910PM细胞增殖及细胞周期的影响。方法 利 用 PCR扩增 KIAA1456编码 区片段，克隆插入载体 Ubi．MCS-EGFP．IRES-puromycin中，构建 Ubi．KIAA1456．EGFP．puromyein (LV—KIAA1456)慢病毒表达载体；将慢病毒表达载体包装生成慢病毒颗粒并感染 HO8910PM细胞 ，72h后观察绿色荧光蛋白 (GFP)在HO8910PM卵巢癌细胞中的表达分布情况；反转录PCR检测 HO8910PM细胞 中KIAA1456mRNA水平，Westernblot 法检测HO8910PM细胞 KIAA1456蛋白表达水平；CCK一8法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞周期。结果 成功构建重 组慢病毒表达载体 LV—KIAA1456，慢病毒颗粒感染HO8910PM细胞后，细胞中KIAA1456的mRNA和蛋白均高表达。过表达 KIAA1456的HO8910PM细胞增殖能力明显抑制、G1期细胞明显增加。结论 过表达KIAA1456显著抑制HO8910PM卵巢癌细 胞增殖 ，细胞周期阻滞于 G1期。 [关键词]卵巢癌；HO8910PM；人 tRNA甲基转移酶9样蛋白(KIAA1456)；慢病毒表达载体 [中图分类号]R737．3，Q279，Q253 [文献标志码]A OverexpressionofKIAA1456inhibitstheproliferationofHO8910PM cells CHEN Huaimei，WANGJia ，ZHANGYingfeng，GAO Yanhong DepartmentofObstetricsandGynecology，University—TownHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing401331，China Correspondingauthor，E—mail：752203031@qq．corn fAbstractf Objective To investigatetheeffectofover-expressed KIAA1456on theproliferalt0nandcelfcycleof HO8910PM cells．M ethods KIAA1456wasamplifiedbyPCR and inserted into lentiviraIexpressionvectorUbi-MCS-EGIFP- IRES-puromycintoconstructUbi．KlAA1456一EGFP-puromycin(LV．KIAA1456)vector．Thereafter，thelentiviralparticleswere packagedandusedtoinfectHO8910PMcells．Thegreenfluorescenceprotein(GFP)expressionwasobservedat72hours． TheexpressionofKIAA1456wasexaminedbyreversetranscriptionPCRandW esternblotting．Cellgrowthwasdetectedwith CCK-8assayandcelIcycleswerean~yzedbyflow cytometry．Results ReversetranscriptionPCRandWesternblottingshowed thalHO8910PM cellsinfectedwithLV-KIAA1456vectorover-expressedKIAA1456mRNA andprotein．CelIproliferationwas inhibitedand G1phase cellssignificantly Increased in HO8910PM cells overe