HPLC分析方法开发及验证.pdfVIP

HPLC 分析方法开发与验证 分析方法开发与验证在不同行业有不同的要求，医药化学行业对于质量的控制非 常严格，高效液相分析是控制产品质量的重要手段，其开发与验证对其它行业有 很好的借鉴意义。 一、分析方法开发 分析方法的开发主要包括色谱柱的选择、流动相的选择、检测波长的选择和梯度 的优化几个方面。目前高效液相多做反相使用，所以本文主要以反相为例进行讲 解。 1.色谱柱的选择 原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻，要求检测使用的色谱柱有 较高的理论塔板数，能提供更好的分离度，从而对可能存在的杂质有更大的分离 的可能性，所以5um 填料的色谱柱长要250mm ，3.5um 填料的柱长要150mm， 基本上都是各个粒径柱长最长的。我比较喜欢近两年新出的亚二微米填料的色谱 柱，50mm 柱长就能提供很高的理论塔板数，而且柱长和粒径小了，流速增加很 多，能节省很多的分析时间，极大的提高工作效率。一般选用直径为4.6mm 或 3.0mm 的柱子，太细了可能会增大柱外效应。填料的孔径对于小分子合成药物不 需要考虑，普通的分析柱都在100A 左右，能满足分析检测的需要。 对于 API 分析方法开发，一般要求必须做色谱柱的筛选实验，最少使用三种不 同类型的色谱柱，每种类型三只，要来自于不同厂家。 三种类型包括：