实验9玉米幼胚再生系统的建立.doc

实验9 玉米幼胚再生体系的建立 摘要 以玉米幼胚作为外植体,研究了培养基对玉米幼胚愈伤组织的诱导结果表明， 1.1 实验材料 玉米幼胚 玉米愈伤组织 1.2 方法 1.2.1 玉米幼胚愈伤组织诱导培养基 1组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 2组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 3组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 4组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 5组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D4.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 6组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D4.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 7组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+NAA0.1mg/L 按照培养基的配置方法来配置以上培养基，灭菌后，分装到4个培养皿中待接种。 1.2.2 玉米幼胚接种 剥去玉米包被，用75%酒精清洗，将玉米棒子切成3、4段，置于75%酒精浸5min，倒去酒精，加0.1%升汞浸泡11min，无菌水冲洗3次。用无菌镊子，小刀取出玉米幼胚，选取完好无损的幼胚接种于培养基。每个培养皿接种10粒，于25℃暗培养。 1.2.3 玉米愈伤组织分化诱导培养基 1组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 2组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +蔗糖30g/L+琼脂7g/L 3组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 4组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 5组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白0.3 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂7g/L 6组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白0.3 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂7g/L 7组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白0.3 mg/L +谷氨酰胺mg/L+0.7蔗糖30g/L+琼脂7g/L 按照培养基的配置方法来配置以上培养基，分装到4个小三角瓶中封口再灭菌，待接种。 1.2.4 分化接种 在超净台上夹取松散的，好的玉米愈伤组织放于分化培养基中进行分化培养。于25℃光照下培养。20d观察生长情况。 2 实验结果 2.1. 计算及结果分析 诱导率（%）=（形成愈伤组织的外植体块数/接种的外植体块数）*100% 污染率（%）=（污染外植体块数/接种的外植体块数）*100% 全班数据统计 愈伤组织诱导 分化培养 组数 诱导率 污染率 出绿率 出苗率 1 86.5% 2.7% 8.1% 5.4% 2 90.9% 3% 0 0 3 88% 0 0 0 4 100% 10% 污染 5 90% 10% 100% 75% 6 97.5% 0 0 0 7 94.4% 0 污染 从整个班试用的培养基中． 2.4 玉米愈伤组织的分化 玉米幼胚愈伤组织的分化失败，愈伤组织不生长，还呈现了黑色枯萎的愈伤，这可能是由于在接种愈伤的时候镊子灭菌后冷却不到位。由于1、5组分化有结果，证明培养基是没有太大的问题，不会导致愈伤的死亡。 3 讨论 所谓体细胞无性系变异就是指在组织培养过程中获得的再生植株具有与其亲本植株不同特征特性的现象。前人实验结果表明影响玉米幼胚诱导愈伤组织的因素主要是基因型，其次是培养条件、幼胚大小、继代时间等。 本实验所用的7种培养基均能诱导出愈伤组织，诱导率都比较高，表明玉米幼胚愈伤组织的诱导具有普遍性。而分化中得出结果的只有两组，其他的都出现枯萎情况，这有待我们继续研究。 参考文献： [1]玉米成熟胚愈伤组织诱导与继代培养的影响因素研究赵锦慧1, 陈 　 龙1,牛子敬2(1.周口师范学院 生命科学系 ,河南 周口 466000 ; 2.周口市种子技术服务站 ,河南 周口 466000) [2]曹俊梅 ,窦秉德 ,陈莉 ,等.玉米幼胚和成熟胚愈伤组织分化反应性比较[J ] .新疆农业大学学报 ,2005 ,28 (2) :10