第2章 MASSON三色染色法.ppt

MASSON三色染色法 主讲：李磊 姜明兴 原理 Masson染色法是利用两种或三种阴离子染料混合或先或后作用而完成鉴别染色的。 胶原纤维呈蓝色（被苯胺蓝所染）肌纤维呈红色（被酸性品红和丽春红所染），这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。组织的渗透性，取决于组织的结构密度，如细致观察，会发现组织和细胞成分都是多孔的构造。 不同的组织和细胞成分，它们的空隙大小是不同的，空隙的大小，决定了组织的渗透性，如空隙小，组织结构致密，渗透性低；空隙宽，组织结构疏松，渗透性高。 如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染。由此说明红细胞对阴离子染料的渗透性最小。肌纤维与胞质次之，而胶原纤维具有最大的渗透性。 根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。 染料分子的大小，主要由其分子量来体现。一般来说小分子量者易于穿透结构致密，渗透性低的组织，而大分子染料只能进入结构疏松，渗透性高的组织。 常用胶原纤维染色而几种阴离子染料的分子量由小到大分别是： 苦味酸（黄色），分子量229.11 橙黄G（橙黄色）分子量452 丽春红（红色）分子量480.42 酸性品红（红色）分子量585.53 苯胺蓝（蓝色）分子量737.72 亮绿（绿色）分子量792.72 甲基蓝（蓝色）分子量799 因此：在Masson染色法中，酸性品红和丽春红染肌纤维，而苯胺蓝或亮丽染胶原纤维。 【试剂配置】： （1）Masson复合染色液 酸性品红1g ；丽春红2g；橘黄G 2g；0.25%醋酸300ml （2）亮绿染色液 亮绿SF 0.1g ，0.2%醋酸100ml。 [染色步骤]： （1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水 （2）Masson复合染色液5min （3）0.2%醋酸水溶液稍洗。 （4）5%磷钨酸5-10min （5）0.2%醋酸水溶液浸洗2次 （6）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次 （7）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 注意事项： （1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时需要使用显微镜控制肌纤维清晰为止。 （2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。 染色结果： 应用意义 定性定量 胶原纤维在体内分布广泛。HE染色不能以不同颜色将其显示出来，而胶原纤维定性特染可作到这一点，故在多种疾病的病理诊断和研究用中具有实用价值. 来源于间胚叶的肿瘤，如纤维瘤，横纹肌瘤，神经纤维瘤甚至它们的肉瘤等都产生一定的纤维，这些纤维在HE染色中都染成红色而难以区别，通过上述方法，一般可区分出该肿瘤组织是胶原纤维源性，还是肌源性，或者是神经纤维源性。 如：1．显示组织，器官的损伤或炎症的修复与纤维板化程度2．判断心肌坏死后被除纤维结缔组织所取代的区域：HE染色时胶原纤维与心肌均为红色，胶原纤维染色则使胶原纤维呈红色，心肌纤维呈黄色。3．鉴别心肌纤维化与心内膜弹纤维增生症。4．区别胶原纤维透明变性与淀粉样变性。5. 对肿瘤方面提供诊断和诊断鉴别的依据。 * * 胶原纤维呈绿色（苯胺蓝染色为蓝色，如上图），肌纤维呈红色，红细胞呈橘红色 *