2专题 基因工程.pptVIP

1.1 DNA重组技术的基本工具 1.需要基因的剪刀——限制性核酸内切酶。 2.如图表示蛋白质工程的操作过程，下列说法不正确的是( ) A.蛋白质工程中对蛋白质分子结构的了解是非常关键的工作 B.蛋白质工程是完全摆脱基因工程技术的一项全新的生物工程技术 C.a、b过程分别是转录、翻译 D.蛋白质工程中可能构建出一种全新的基因 * 意义： 克服远缘杂交不亲和的障碍 操作环境： 操作对象： 操作水平： 实质： 结果： 生物体外 基因 DAN分子水平 基因重组 新的生物类型或生物产品 2.需要基因的针线——DNA连接酶。 3.需要基因的运输工具——运载体。 识别______________________________序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的__________断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一类酶。 4000种。 1.来源： 2.种类： 3.作用： 5.结果： 形成两种末端 黏性末端 平末端 一、限制性核酸内切酶----“剪刀”： 双链DNA 分子的某种特定的核苷酸 磷酸二酯键 4.识别的序列：大多由____个核苷酸组成，少数由 4、5或8个核苷酸组成 6 限制酶 同种限制酶切出的黏性末端相同 同种限制酶切出的平末端也相同 - C - A - - G - T - T - C - C - A A - G - G - T - T - G - A - C - 下列黏性末端是否属于同一种限制酶切割形成的？ 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。 二、DNA连接酶－－“针线” 氢键 —自动生成 三、基因的运载体 2、运载体的种类： （1）质粒 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于核DNA之外能自我复制的很小的双链环状DNA分子。 （2）噬菌体 （3）某些动植物病毒 将外源基因送入受体细胞 1、运载体的作用： 天然质粒能否直接用于基因工程操作中？ 复制原点：能复制并带着插入的目的基因一起复制 限制酶切位点：有一至多个种 标记基因：用来检测目的基因是否导入受体细胞，将含有目的基因的受体细胞筛选出来。P11 以质粒为例，了解运载体的特点 天然质粒一般不能直接用于基因工程操作中！！ 以质粒为例，了解运载体的特点 1、小型、裸露DNA 2、有一个至多个限制酶切割位点 3、能在受体细胞内稳定存在并复制 4、有标记基因 天然质粒一般不能直接用于基因工程操作中！！ 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 ①、从基因文库中获得 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 ②、利用PCR技术扩增目的基因 变性 复性 延伸 ③、人工合成 1.2 基因工程的基本操作程序 2、基因表达载体的构建 1、目的基因的获取 【点拨】启动子、终止子与起始密码子、终止密码子不同：启动子、终止子在DNA 上,在遗传信息转录时起调控作用；而起始密码子、终止密码子在mRNA上,在翻译时起作用,决定翻译的开始和结束。 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 转化 固定吸管 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 转化 4、目的基因的检测与鉴定 杂交带：将待测的DNA样品酶切后，电泳处理，不同大小的片段分离，形成一条条层带（看不见），然后用醋酸纤维膜吸附，通过化学处理，再用放射性探针涂布、洗脱。探针就保留在该片段所在的层带。然后采用放射自显影技术，即含溴化银的乳胶（好像和胶卷显影一个原理）涂布，黑暗摆放，放射性元素衰变放射出的伽马射线使探针存在的层带呈现黑色，这些黑色层带即杂交带。 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 转化 4、目的基因的检测与鉴定 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 转化 4、目的基因的检测与鉴定 如何让一头奶牛产生含有人的生长激素的牛奶，说出相关步骤 提取人的生长激素基因——构建人的生长激素基因表达载体——将人的生长激素基因导入奶牛的受精卵——人生长激素基因的检测与鉴定 【高考警示钟】 1.目的基因的插入位点不是随意的 基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。 2.基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象 第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步