PEG细胞毒性.pptVIP

PEI和PEG对细胞毒害作用的探究 展示者：李苏 3070701016 同组成员：王诗豪 3070701056 实验目的和要求 MTT法测定聚乙烯亚胺（PEI）的细胞毒性 MTT法测定PEG的细胞毒性 “细胞毒性” 在学术文献中的定义 根据欧洲标准化组织CEN1992年30号文件的定义,细胞毒性是指由产品、材料及其浸渍物所造成的细胞死亡、细胞溶解和细胞生长抑制。 外来化学物质 进入机体 小剂量对机体影响甚微 大剂量造成机体严重后果，甚至导致死亡 实验原理 溴化噻唑蓝四氮唑 MTT 细胞内线粒体酶作用 甲臜 DMSO 570nm测定吸光度 吸光度值与细胞数量呈正相关 细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法： MTT、XTT（一种线粒体脱氢酶的作用底物）法： 利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测。 LDH（乳酸脱氢酶）的方法： 通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性。 其它酶方法： 如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等。 实验步骤 1、细胞接种，将293T细胞接种到96孔板上，每孔约5000个细胞。 2、细胞培养，将培养板放入CO2孵箱，在37℃、5% CO2及饱和湿度条件下，培养至实验所需的细胞数量（一般为16小时）。 3、吸去培养液，用PBS清洗细胞，加入无血清培养液，在细胞孔中分别加入PEI溶液和PEG溶液，加入PEI的试样使得每孔中PEI的浓度分别为0，5，10，25，50，100，200μg/mL ，加入PEG的试样使得每孔中PEG的浓度分别为0，0.16，0.8，4，20，100，500mg/mL，每孔液体的总体积在200μL。（注意每种浓度都为三复孔，并要有不加任何PEI的对照孔至少3孔） 4、分别孵育0.5，1，2，3小时。 5、吸去培养液，每孔加入90 ?l 无血清培养液和10 ?l的5mg/mL MTT溶液，37℃孵育2－3小时。 6、翻板法弃去液体，每孔加入100 ?l DMSO，在震荡器上震荡10分钟。 7、在酶标仪上570nm波长测OD值。 8、统计数据。 0.5小时 PEI浓度（ug/ml） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率 0 0.154 0.099 0.092 0.115 0.034 1 5 0.105 0.136 0.133 0.125 0.017 1.087609 10 0.121 0.075 0.091 0.096 0.023 0.834463 25 0.067 0.056 0.123 0.082 0.036 0.712488 50 0.112 0.056 0.093 0.087 0.029 0.756534 100 0.101 0.080 0.100 0.094 0.012 0.816554 200 0.090 0.095 0.072 0.086 0.012 0.745402 实验结果 1小时 PEI浓度（ug/ml） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率 0 0.154 0.099 0.092 0.115 0.034 1.000 5 0.105 0.100 0.133 0.113 0.018 0.981 10 0.084 0.119 0.078 0.094 0.022 0.815 25 0.070 0.123 0.089 0.094 0.027 0.819 50 0.092 0.054 0.051 0.066 0.023 0.573 100 0.034 0.070 0.038 0.048 0.020 0.414 200 0.042 0.060 0.047 0.050 0.009 0.434 2小时 PEI浓度（ug/ml） 1 2 3 平均值 标准偏差 存活率 0 0.154 0.099 0.092 0.115 0.034 1.000 5 0.089 0.066 0.086 0.080 0.012 0.700 10 0.077 0.052 0.091 0.074 0.020 0.641 25 0.043 0.056 0.026 0.042 0.015 0.364 50 0.022 0.025 0.026 0.024 0.002 0.213 100 0.031 0.024 0.007 0.021 0.012 0.179 200 0.027 0.012 0.018 0.019 0.008