1.2 基因工程的基本操作程序.ppt

1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 阅读教材P8-11 请举出三个以上的例子 1、从基因文库中获取目的基因 （1）.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 非编码区 非编码区 编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 终止子 基因的结构 启动子 原核 真核 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断. 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游的RNA聚合酶结合位点. 启动子 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有RNA聚合酶结合位点(启动子)。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 非编码序列： 包括非编码区和内含子 与RNA聚合酶结合位点 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是_____ 的，边_________边_________ 编码区是间隔的、 _____的，先_____后_____ 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 连续 不连续 编码区 非编码 转录 翻译 转录 翻译 1．下列关于基因结构的认识中，正确的是 （ ） A．大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列 B．乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子 C．大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的下游 D．水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列 2．（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是 （ ） A．编码区都有能编码蛋白质的序列 B．编码区都是连续的 C．非编码区都能调控遗传信息的表达 D．非编码区都有RNA聚合酶结合的位点 D ACD 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 重组载体 基因组文库 导入受体菌中储存 （2）.基因文库的构建 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢? 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性 （3）从基因文库中得到目的基因的方法 ——直接分离法(鸟枪法) 直接分离法 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (鸟枪法) 多用于原核生物 3.构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA   B、线粒体DNA C、总mRNA   D、tRNA 4.目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是 A、某生物的全套基因就是一个基因文库 B、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物 体内，则这个生物就是一个基因文库 C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库 D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文库 A C 2、利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 ②原理：__________ 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 PCR技术 原理： 前提： 原料： 优点 过程： PCR扩增仪 DNA复制 已知目的基因的一段核苷酸序列 ：以_____方式扩增， 在短时间内大量扩增目的基因 指数 模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子 变性 复性 延伸 ③过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA