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细胞内p53蛋白LC_MS_MS定量方法及其应用_李盈淳
学报
Journal of China Pharmaceutical University :
2012 ，43 (6)519 － 525 519
细胞内p53 蛋白LC-MS /MS 定量方法及其应用
* ＊＊
， ， ， ，
李盈淳 汤志远 吴梦秋 王广基 郝海平
( ， 京210009)
中国药科大学药物代谢动力学重点实验室 南
p53 LC-MS /MS ， D p53
摘 要 建立细胞样品中 蛋白的 定量方法 应用该定量方法测定放线菌素 作用下细胞中 表达
。 p53 ， ， VEY-
量的变化 采用免疫沉淀法提取细胞样品中的 蛋白 对提取后的样品进行酶解 基于肽图分析选择特异性肽段
LDDR (m /z 455. 22 + -681. 21 + )作 ， VEYIEDR (m /z 462. 12 + -695. 21 + )作 ，
为定量肽段 设计合成肽段 为内标肽段 建立该肽段的
LC-MS /MS ， p53 ; D HCT116 p53
定量方法 通过该肽段表征 蛋白的量 应用该质谱定量方法对放线菌素 给药后的 细胞中的
。p53 ， (R2 = 0. 999 3)， 2. 2 ～ 112. 3 pmol /mL ;
蛋白的表达量进行测定 蛋白质谱定量方法学考证表明 方法的线性良好 范围
， ， ; D p53
专属性好 基质中无干扰成分 批内批间精密度及稳定性均符合生物样品的测定要求 放线菌素 给药后细胞中 蛋白
。 p53 LC-MS /MS
的表达量呈给药浓度与给药时间依赖性增加 建立的细胞样品中 蛋白的 定量方法可以准确的测定细胞内
p53 。
的 蛋白表达量
p53 ;LC-MS /MS ; D ;
关键词
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