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褐藻糖胶提取纯化及检测;一、项目简介;二、实验流程;1、仪器与试药 旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂； 循环水式真空泵，郑州长城科工贸有限公司； V1100可见分光光度计，上海美谱达仪器有限责任公司； 电热恒温水浴锅，江苏红旗医疗机械厂。 葡萄糖，上海化学试剂公司（； DEAE纤维素，国药集团化学试剂有限公司，（sar:9013-34-7,批号：F2010051）； 其它实验用试剂均为分析纯。;层析分离：层析所用填料，DEAE纤维素。 ;2.1药材前处理;2.2标准曲线的制备;(1)葡萄糖标准品溶液的制备;(2)苯酚溶液的配制;(3)标准曲线的绘制;(3)标准曲线绘制;标准曲线如下图1: ;2.3褐藻糖胶的提取 ;2.3.1提取方法的选择（水提、酸提、碱提）;再精密吸取1.0ml溶液于具塞试管中，加蒸馏水至2.0ml，同时设置一空白对照。精密吸取配制好的4%苯酚溶液1.0ml于试管中，摇匀，加盖，迅速加入浓硫酸5ml，充分振摇，在40℃ 水浴中加热20min，取出置冷水浴中放5min，在490nm处进行比色测定，记录所得数据，计算结果。 结果见表1。 ;提取过程：通过水浴控制实验温度，提取过程中用玻璃棒时时搅拌。 ;;2.3.2提取单因素实验考察;2.3.2.1不同pH对提取的影响;表2不同PH对提取的影响;2.3.2.2不同温度对提取的影响;不同温度下的提取液;表3 不同温度对提取的影响;2.3.2.3不同溶剂量对提取的影响;表4溶剂量对提取的影响;2.3.2.4不同提取时间对提取的影响;表5 提取时间对提取的影响;2.3.3提取正交试验考察;;;2.3.3.1实验过程(1)配置PH=4的溶液;(2)配制PH=5的溶液;(3)配制PH=6的溶液;2.3.3.2正交试验样品的含量测定;;表9 正交试验结果直观分析：;2.3.3.3正交验证实验;表10 正交验证实验结果; 2.3.4 Sevag除蛋白;除蛋白：采用Sevag法除蛋白，药液与正丁醇：氯仿（5：1）混合溶剂萃取,水相与溶液相交界处即为蛋白杂质。;表11Sevag除蛋白实验结果; 2.3.5 DEAE纤维素柱层析分离;层析柱预处理，DEAE纤维素，蒸馏水漂洗3次，用1mol/LNaOH400ml浸泡4小时，蒸馏水洗至中性，再用1mol/LHCL浸泡4小时，蒸馏水洗至中性，平衡。 ;2.3.5.2 层析样品制备; 2.3.5.3 DEAE纤维素梯度洗脱;上样及分离：上样采用湿???上样，即提取液直接加入。洗脱过程控制流速，每10ml 收集一管，并编号。 ;检测：采用苯酚-硫酸法检测样品含量。;在490nm波长处测定吸光度，计算含量。 ? ;蒸馏水洗脱曲线;不同浓度NaCl洗脱曲线;*;图4 0.3mol/LNaCl洗脱曲线;产品;图5 0.3mol/LNaCl洗脱曲线;产品;表12DEAE纤维素柱层析分离产品含量;*; 四、实验结论;*