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维普资讯 上海医学检验杂志1992年第7卷第3期 … DiBr—PAESA显色法测定血清铜的探讨 ；r一 山东济宁医学院附属医院(272129) 赵元明 刘凌云 南京孑区南京总医院生化科 盟 ~／ “，f，．L， 血清铜的测定方法有 ：火焰和无火焰原子吸收 显色剂浓度在0．o2～o．o4mmol／L之间，吸光度最 分光光度法、分光光度法、发射光谱法、 中子活化 大，因此选用0．o2mmol／L。 分析、阳极溶出伏安法等。有的需特殊仪器，难以 2．SDS用量：本法中加入SDS能增加铜与DiBr- 推广应用，有的使用二乙基二硫代氨基甲酸盐显色 PAESA的络合能力，提高反应的灵敏度，并促进 法 [1，。该法虽选择性较好，但生成的络合物在酸中 蛋白质的溶解，消除浊度。浓度从 2o~8ommbl／L 不稳定、灵敏度低 …，且操作繁琐，费时，用血量 选用 5ommol／L的SDS最合适。 大等缺点。本文参考文献吲建立了用DiBr—PAESA 3．抗坏血酸用量：抗坏血酸是一种还 原剂，并 [4一(3，5一溴一2一吡啶偶氮)N一乙基一N一磺基丙基苯 能使与铜蓝蛋白结合的铜游离出来。，经实验证实， 胺]作显色剂直接测定血清铜的方法。该法敏感、快 0．o3mol／L为最适浓度。 ! 一 速 操作简单，并能用于自动分析。 4．pH选择 ：用不同pH的显色剂应用液，按本 法测定同一血清标本的吸光度，pH在4．6以下虽吸 ． ， 材 料 租 方 法 ． J ． 一 - 光度较高但不稳定；pH大于5．4时吸光度开始下降， 一 、 器材 Beckman700生化分析仪 (美国) pH在4．8～5．4时吸光度恒定，所以选择pH5．o为最 WFH—IB原子吸收分光光度计 (北京第二光学仪 适 pH。 器厂 )。 5．波长的选择 ：取—份混合血清 (铜 含 量： =、试剂 1．5ommol／L 十二烷 基 硫 酸 钠 l1．7pmol／L)按本法显色，用．Beckman700分析 (SDs)：取1．442gSDS(AR)溶~looml醋酸盐缓冲 仪取波长5oO 7oonm~围内测其吸光度，并绘制曲 液中(o．2mol／LpH5．o)。2．DiBr—PAESA贮存液 线，吸收峰在58onm 处。 (O．02reotol／L)：DiBr-PAESA (Sigm~)i．Omg用 =、方法性鼍 。。 ． 试剂(1)溶解并加至1coral。3．铜显色剂应用液 ：取 1．重复性：取含铜高、--低不同浓度 的两份混合 上述贮存液14．oml2H人 1．oral0．45mol／L抗坏血 血清，进行批内2o次和批阅lO次 (每天2次共5天) 酸溶液混匀即可。4．铜标准液 ：精称 ．100．0rag的金 测定，结果：批内Cv：1．6～2．3％、批问CV：1．96N 属铜 (99．99％)，用适量的硝酸 (HN03：H2O一1：1) 3．6％。 ． 溶解后以去离子水加至 lOooml，此液为含铜 1．574 2．回收试验：取一份混合血清分别加入 7．84、 mmol／L的贮存液。用‘时稀释成15．741~mol／L的应 15．74、31．48vmol／L的铜标准液，进行回收试验， 用液。 ’