15-甾体激素.ppt

第十五章 甾体激素类药物的分析 二、理化性质与鉴别试验 吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸光度。反映了药物的紫外吸收特征 （二）鉴别试验 （7） 酯的反应 一般先进行水解，生成相应的羧酸，再根据羧酸的性质来进行鉴别。 （四）游离磷酸盐的检查 E. 温度与时间 室温（25℃） 反应40～45 min (1) 原理 第五节 体内甾体激素类药物分析 此类分析的特点： 竞技运动员体内违禁甾体激素药物的分析 图：志愿受试者尿样中睾酮等七种违禁甾体激素药物的LC-MS测定 左炔诺孕酮血浆药代动力学和生物等效性研究 左炔诺孕酮是一种高效的孕激素，作为速效避孕药，广泛应用于临床和计划生育。有文献报道，建立LC-MS/MS法检测血浆中左炔诺孕酮的方法，研究左炔诺孕酮分散片在健康自愿受试者体内的药动学和相对生物利用度，并评价生物等效性，为临床用药提供依据[5, 6]。 对上述结果进行方法学考查 结果表明: Thank You! 检测器 （二）UV法 △４-3-酮 240nm（±） 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 苯环 280nm（±） 雌激素 1.四氮唑比色法 2.异烟肼比色法 3. Kober反应比色法 （三）比色法 肾上腺皮质激素类 C17-α－醇酮基 强还原性 （1）原理 1. 四氮唑比色法 有色甲瓒 四氮唑盐 醇酮基 - a - 17 C OH - [还原] 三苯甲瓒↓深红 氯化三苯四氮唑 （TTC） 红四氮唑（RT） [H] 蓝四氮唑（BT）525 nm （2）方法 对照品法 25 ℃ 氢氧化四甲基铵 对照液 供试液 A TTC 40～45′ 暗 （3）讨论 A. 基团对反应速度的影响 C11= O＞ C11－OH C21－OH＞ C21-酯 B. 溶剂、水分的影响 以无醛乙醇为溶剂，水含量大时，呈色减慢，不超过5％对结果没有影响 C. O2与光线的影响 避光 隔绝空气、快速、充N2 D. 碱的种类及加入顺序 以氢氧化四甲基铵的结果最佳 加入顺序： 皮质激素 碱试液 四氮唑盐 肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素 C3－酮基 （1） 原理 异烟腙（黄） 酮基 异烟肼 - 3 C HCl （缩合） 2. 异烟肼比色法 420 nm 异烟腙（黄色） （2）方法 对照品法 60 ℃ 异烟肼 无水甲醇 对照液 供试液 A 暗60′ （3）讨论 反应速度（反应专属性） A. C3=O＞C17= O 、C20= O C11= O 不反应 反应专属性 C3－酮基 B. 溶剂的选择 异烟肼盐酸盐→受溶解度的影响 无水甲醇 无水乙醇 对试剂的稳定性好、呈色强度较无水乙醇中高、但对植物油的溶解度小 C.水分、温度、O2与光线的影响 含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓ O2与光线对反应的影响不大 t℃ ↑ → ν↑ 酸:异烟肼 = 2:1 最大吸收度 盐酸浓度0.0074mol/L 异烟肼浓度0.00365mol/L D. 酸的种类和浓度及异烟肼的浓度 H2SO4-乙醇 加热 H2Oλmax=465 加热 雌激素 黄色 桃红 λmax=515 3. Kober反应比色法 雌二醇-3-甲醚 λmax=465nm λmax=515nm 铁－酚试剂 [(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚] * 铁盐的作用 加快黄色产物的形成、转化 加强红色产物的稳定性 * 酚的作用 加快红色产物的形成 消除反应产生的荧光 1 药物代谢研究 2 生物利用度研究 3 违禁药物监测 1 方法的专属性强 给药剂量很小 2 药物浓度低 3 分析方法的灵敏度较高 4 LC-MS测定法[3] 在线固相微萃取(solid-phase microextraction, SPME) 技术[3] HPLC- UV测定法[4] 方法 [3] Saito K, Yagi K, Ishizaki A, Kataoka H. Determination of anabolic steroids in human urine by automated in-tube solid-phase microextraction coupled with liquid chromatography–mass spectrometry. J of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2010, 52: 727–733 [4]