血管平滑肌细胞原代培养经验.pdfVIP

兔血管平滑肌细胞原代培养 我是某医学院的硕士研究生，课题涉及到兔血管平滑肌细胞的原代培养，实验开始非常 不顺利，进行了几次实验均一无所获。后来我在丁香园上发帖提问 （/bbs/topictpg=1ppg=1age=0#0 ），得到了丁香园网友 的热情帮助，在网友的帮助下，经过不断尝试改进，最后我终于得到了想要的血管平滑肌细 胞，完成了实验并顺利毕业。鉴于网上还有很多网友在提有关血管平滑肌细胞原代培养的问 题，我现在将自己的毕业论文中细胞培养的部分共享，由于论文还没发表，部分图片不能公 开，请见谅！欢迎转载。 ① DMEM 培养基的配制： 在新购进的 500ml DMEM/F12 培养基内加入 5ml 双抗及适当比例的FBS(原代 20% ，3 代后5%) ，配制成完全培养基，4℃保存备用。 ②兔 SVMCs 的原代培养： 体重 2kg～3kg 的雄性日本大耳白兔，耳缘静脉注射空气栓塞处死后，置于操作台。从 腹部切开，分离腹部血管，暴露腹主动脉，无菌条件下切下约 5cm 长的动脉，装入含双抗的 PBS 中备用。在超净台内将取材的血管在DMEM 中漂洗数次，小心将外膜剥去，用双抗浸 泡数分钟后，直接加入胰酶，在胰酶双抗混合液中用眼科剪将组织块剪碎，将双抗和胰酶混