结核分枝杆菌金胺O荧光与萋―尼染色显微镜镜检结果比较.docVIP

结核分枝杆菌金胺O荧光和萋―尼染色显微镜镜检结果比较 　　萋一尼染色法和金胺O荧光染色法[1]是痰涂片镜检常用的二种染色方法。萋一尼染色法结果较为准确且因为其操作简单、费用低、速度快，1 h可以报告结果而一直延用至今，但阳性检出率较低，无法满足临床需求。金胺O荧光染色法需要荧光显微镜，但传统的荧光显微镜的检测成本过高，一直没有普及，发光二极管荧光显微镜很好解决了这一问题，近几年逐渐广泛应用于结核分枝杆菌的痰涂片镜检。为了解二种检验方法对痰标本结核分枝杆菌的检出情况，我们对就诊的可疑肺结核患者的痰标本进行了二种方法的对比分析，现报道如下 1 资料与方法 1.1试剂和器材 金胺O荧光染色液和萋-尼染色液均按《结核病诊断实验室检验规程》[1]进行配制；使用德国蔡司CX-21发光二极管全冷光源荧光显微镜及奥林巴斯CH30生物显微镜 1.2检测标本 痰标本来自2014年1月～2015年12月丹阳市人民医院结核病门诊就诊的可疑肺结核患者，全部为初诊患者。本实验共收集432例患者的痰标本1296份。每位患者收集3份深咯痰标本，分别为清晨痰、夜间痰和即时痰。标本量为3～5 ml，每份痰标本涂抹2张玻片，分别进行萋-尼染色和金胺O荧光染色 1.3涂片 用竹签挑取痰标本的脓样、血样或干酪样部分约0.05～0.1 ml于玻片正面的右侧2/3中央处，均匀涂抹成宽1.0 cm，长2.0 cm的椭圆形痰膜，厚薄适中，室温下自然干燥。按照《结核病诊断实验室检验规程》[1]进行初染、脱色、复染 1.4镜检及结果判定 萋-尼染色用普通光学显微镜镜检，10倍目镜、100倍油镜观察。在淡蓝色背景下，结核分枝杆菌呈红色，其他细菌和细胞呈蓝色。金胺O荧光染色用发光二极管显微镜，10倍目镜、40倍物镜观察痰涂片，在暗视野背景下，结核分枝杆菌呈现橘黄色荧光，呈杆状或短棒状。萋-尼染色镜检结果报告标准为：抗酸杆菌阴性：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌；报告抗酸杆菌菌数：1～8条/300视野；抗酸杆菌阳性（1+）：3～9条/100视野；抗酸杆菌阳性（2+）：1～9条/10视野；抗酸杆菌阳性（3+）：1～9条/视野；抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条/每视野。金胺O荧光染色镜检结果报告标准为：金胺O荧光染色抗酸杆菌阴性：0条/50视野；金胺O荧光染色报告抗酸杆菌菌数：1～9条/50视野；金胺O荧光染色抗酸杆菌阳性（1+）：10～99条/50视野；荧光染色抗酸杆菌阳性（2+）：1～9条/视野；金胺O荧光染色抗酸杆菌阳性（3+）：10～99条/视野；金胺O荧光染色抗酸杆菌阳性（4+）：≥100条/每视野 1.5统计学方法 采用STATA 10.0统计软件对数据进行χ2检验，P0.05，差异无统计学意义，见表2 3 讨论 金胺O荧光染色方法染色镜检时抗酸杆菌在暗视野背景下发出橘黄色荧光，黑色背景与抗酸杆菌对比鲜明，非常明显容易发现，金胺O荧光染色染色读片放大倍数为400倍（40倍物镜，10倍目镜），所观察的视野面积大，故它的灵敏度比萋-尼染色方法普通显微镜镜检高[2]。本研究结果显示，金胺O荧光染色组检出阳性率为31.9%，萋-尼组为18.5%，χ2=7.21，P0.05，差异无统计学意义，结果也与陈燕梅等[2-5]报道相符。表明痰标本含菌量较少时直接涂片金胺O荧光染色法镜检较萋-尼法具有更高的灵敏度，这样可防止漏诊的出现，对于那些病变活动性轻、排菌量较少的肺结核诊断具有重要意义，及时准确发现这部分具有传染性的肺结核患者对于我国的结核病预防控制、流行病学调查、治疗等有重大意义[3] 参考文献： [1]中国防痨协会基础专业委员会.结核病诊断实验室检验规程[M].北京：中国教育文化出版社，2006：13-29. [2]尚美.刘冠，赵立平，等.发光二极管荧光显微镜实验室诊断效果评价[J].中国防痨杂志，2010，32（5）：275-278. [3]陈燕梅，钱明，江勇，等.荧光染色发光二极管显微镜检测结核分枝杆菌的效果分析[J].中国防痨杂志，2011，33（9）：585-587. [4]申长海.荧光染色在结核病细菌学检验中的应用[J].河南预防医学杂志，2002，13（1）：7-8. [5]戴学海，金法祥，汤佳良，等.金胺O荧光染色法在结核病细菌学检验中的应用[J].中国卫生检验杂志，2008，18（5）：851-923. 编辑/翟辰万