三、基因工程的载体.ppt

第三章：基因工程的载体 用于基因克隆的载体 报告基因：载体上导入，证明载体已经转入宿主细胞中，将含有目的基因的宿主从其它细胞中区分出来，比如抗药性报告基因，LacZ，lux等 蓝白斑筛选：利用β-半乳糖苷酶插入失活的载体，在生色底物(X-gal)和诱导物(1PTG)存在时，可形成深蓝色菌斑。用这种载体进行克隆时，β-半乳糖苷酶基因的大部分被外源DNA片段取代，所产生的重组体丧失α-互补能力，在含有X-gal和IPTG的平板下形成无色菌斑。因此，对于这类重组载体，可通过组织化学方法进行重组子的筛选。 用于基因转移的受体菌或细胞 噬菌体或病毒DNA 大肠杆菌的 l 噬菌体DNA l-DNA载体的构建：删除重复的酶切位点 野生型的l-DNA链上有5个EcoRI位点和7个HindIII位点，不 利于重组操作，必须删除至1 - 2个 同时，为了便于各种来源的DNA片段的克隆，还需要增加一 些单一的酶切位点 除了简单的切割外，还需要采用定点突变技术去除或增添酶 位点 噬菌体或病毒DNA 大肠杆菌的 l 噬菌体DNA l-DNA载体的构建：加装选择标记 与质粒不同，野生型l-DNA上缺少合适的选择标记，因此 加装选择标记是l-DNA克隆载体构建的重要内容 l-DNA克隆载体上的选择标记主要有下列两类： 免疫功能类标记 颜色反应类标记 噬菌体或病毒DNA 大肠杆菌的 l 噬菌体DNA l