王镜岩 生物化学 经典课件 17蛋白质合成和基因工程 考研必备 学生物化学必备.ppt

（五）筛选目的基因的其他方法 1.蛋白质组学：通过双向电泳，聚焦层析-电泳等方法对比相关样本，确定目标蛋白，经测序用遗传密码推测基因的部分序列，用PCR等方法获取目的基因； 2.基因芯片：分析相关样本的mRNA，确定目标基因； 3.mRNA差异显示：提取欲对比的两个样本的mRNA，分别用5′T11-MN或5′-T12MN(M代表除T以外的任意核苷酸，N代表任意核苷酸)共12种不同的下游引物合成cDNA的第一链，所得24种cDNA的第一链均用通用引物合成第二链，并引入放射性同位素标记，将相对应的12对cDNA分别用测序胶电泳分离，放射自显影，对比二者的条带，找出差异，回收特异性差别条带，扩增，测序，或合成探针筛选基因。 4.表达序列库：将基因克隆到表达载体，表达后用免疫学方法、产物功能测定、产物的结构研究等方法鉴定特定的基因。 5.基因定位诱变 6.筛选的目的基因通常要进行序列测定 三、克隆基因的表达 (一) 基因表达的控制元件 在典型的表达载体中，真核编码序列被插入启动子和转录起始点的下游，插入位点的下游应当有转录终止信号，转录产生的mRNA应包含核糖体结合位点。 （二）RNA的表达 表达载体携带能够被噬菌体SP6的RNA聚合酶辨认的启动子。 SP6 RNA聚合酶可以在体外高效率地转录,将任何目的DNA插入SP6启动子下游的多