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动物细胞培养大实验
细胞培养;无菌室;着装;进入无菌室前先用肥皂洗净双手，然后用1‰ 新洁尔灭浸泡消毒5分钟;将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精浸泡消毒，迅速进入无菌室。 ;将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔 ;用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，
剪取肾组织;剪碎组织;接种组织块; 移入培养箱中，静止2～3小时
（注意贴有组织块的一面朝上）;然后将细胞培养瓶轻轻翻转，继续静止培养。;单细胞培养; 实验过程
一. 取材
1. 处死母鼠，75%酒精消毒鼠体，带入无菌室。
2. 剖开腹腔，剪开子宫，每组取 1 只胎鼠。
3. 置放有Hanks液的小培养皿中去头、四肢、内脏。
4. 把胴体移入青瓶，加Hanks液少许，剪成1mm3的小块。
5. 加Hanks液吹洗，自然沉降吸弃上清液体。
重复洗涤3次，去除血细胞。
6. 移入离心管，加Hanks液至5ml，1000转/分钟 离心5分
钟，弃掉上清液。; 二. 消化
1. 加入约3ml消化液，放入37℃水浴，消化约30分钟，
其间不时轻摇几次，待组织块变疏松、发白时取出。
2. 加入3ml 完全培养液 混匀（终止消化)，离心去上清。
3. 加入适量Hanks液，吹洗，离心去上清（除去胰酶）。
4. 再加入适量Hanks液，用吸管反复吹打，使细胞分离。
5. 静置2-5分钟，使组织块沉降，吸取上清液到另一离
心管，加Hanks液稀释到 5 ml（计数）。 ;;实验六 细胞计数;实验六 细胞计数;二. 计数
1. 用酒精棉球擦洗计数板，凉干，加干净盖玻片一张。
2. 吸取 2-3 滴细胞悬液，从盖片边缘缓慢滴入，使其充
满盖片和计数板间的空隙，不留气泡，且液体不流入
凹槽。
3. 将计数板置低倍显微镜下观察计数。
细胞数/ml = 4个大格内细胞总数×104 / 4。
;三. 计数规则 ;实验六 细胞传代培养;步骤：;实验六 培养细胞的观察养护; 细胞在保证恒温、氧气、 CO2 的条件下才能正常生长，还需经常观察，检查有无营养、染菌等情况。;时间安排：
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