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藏药材苞叶雪莲质量控制方法研究 　　[摘要]为了对藏药材苞叶雪莲进行有效的质量控制，该研究建立了藏药苞叶雪莲的质量控制方法与标准。参照2010年版《中国药典》附录相关方法，对苞叶雪莲药材的水分、灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物进行测定；采用显微鉴别，对苞叶雪莲全草及其叶子的粉末建立显微鉴别方法；采用薄层色谱法，以硅胶G为薄层板，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：6：1：2）的上层溶液为展开剂，以绿原酸和芦丁为对照，建立其薄层鉴别方法：采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液（17：83）为流动相，流速为1.0 mLmin-1，柱温40℃，检测波长为350 nm。结果不同产地的藏药材苞叶雪莲全草及其叶子的显微特征一致：薄层色谱在日光下检视，能得到较好的分离：含量测定方法学研究结果表明，绿原酸在0.119 2～0.715 4μg（r=0.999 9），芦丁量在0.160 7～0.964 4μg（r=1000），与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为105.4%（RSD 1.4%）和99.50%（RSD O.91%）：醇溶性浸出物的结果为26.01%～31.59%；水分为7.16%～8.04%，总灰分为8.46%～11.14%，酸不溶性灰分为0.50%～1.87%。上述结果表明建立的方法具有良好的专属性和准确性，可用于藏药苞叶雪莲药材的质量控制 [关键词]苞叶雪莲；藏药；绿原酸；芦丁；显微鉴别；薄层色谱法；高效液相色谱法 苞叶雪莲为藏医药习用药材，为菊科植物苞叶雪莲Saussurea obvallata（DC.）Edgew.的干燥地上部雪莲Saussurea obvallata（DC.）Edgew.的干燥地上部分。传统藏医药理论认为其具有清热解毒的作用，用于癫痛，中风，癫狂，麻风等。目前，该药材的现行标准比较简单，仅有性状和显微鉴别2项，为了进一步控制好该药材的质量及其提高制剂质量标准的可控性，本文采用显微鉴别、薄层色谱鉴别和高效液相色谱的方法，包括水分、总灰分和酸不溶性灰分的检查、醇溶性浸出物的测定，对7批不同产地的苞叶雪莲药材样品进行了检测，制定了合理的限度，为藏药苞叶雪莲药材及其成方制剂的质量控制提供了依据 1材料 OLYMPUS光学显微镜（BXS1型）；超声波清洗器（KQ-250B型，昆山市超声仪器有限公司）；AB204-S电子天平[梅特勒-托利多（上海）仪器公司]；HH系列恒温水浴锅（江苏金坛中大仪器厂）；DHG-9240A型电热鼓风干燥箱（上海―恒科技仪器有限公司）；SX5-12型箱式电阻炉（黄骅市卸甲综合电器厂）；高效液相色谱仪（Waters 2965-2998）；薄层硅胶G板，青岛海洋化工厂分厂；层析缸。甲醇和磷酸为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯 对照品绿原酸（100080-200707）和芦丁（110753-200413）购自中国食品药品检定研究院。此次研究所收集到的7批苞叶雪莲药材均来自西藏、青海、四川和云南，经西藏自治区藏医学院专家鉴定均为藏医习用苞叶雪莲药材 2方法与结果 2.1显微鉴别 2.1.1全草显微鉴别特征 本品粉末呈浅黄绿色。冠毛多碎断，为多细胞组成的分枝状毛，壁稍厚，直径2～100μm。纤维大多成束，直径10～20μm，末端渐尖，壁较厚，具胞腔。花粉粒类圆形，直径30～50μm，外壁有疣状突起，萌发孔3个。气孔为不定式。腺毛直径30～60μm，由20～30个细胞组成，腺柄细胞双列或单列成类方形或长方形，壁稍厚，腺头细胞稍短，壁薄，排列紧密成头状。非腺毛由5～10个细胞组成，基部有4～8个方形细胞，顶端一个细胞特长，毛状，胞腔狭。导管多为螺纹，梯纹或网纹，直径10～30μm，见图1 2.1.2叶子显微鉴别特征 本品粉末淡绿色。上表皮细胞垂周壁深波状弯曲，角质纹理不明显，气孔不定式。下表皮细胞壁深波状弯曲，气孔较多，不定式，副卫细胞3～5个。非腺毛上下表皮均可见，由3～10个细胞组成，顶端细胞粗长呈棒槌状，皱缩扭曲，见图2 2.2绿原酸 芦丁薄层色谱鉴别 2.2.1供试品溶液的制备 取本品粉末0.5g，加甲醇20 mL，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液 2.2.2对照品溶液的制备 取芦丁对照品、绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL各含5 mg和2 mg的溶液，作为对照品溶液 2.2.3检测法 照薄层色谱法（《中国药典》2010年版附录VIB）试验，吸取上述3种溶液各3～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：6：1：2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，再喷以1%