藿香正气合剂HPLC指纹图谱探讨.docVIP

藿香正气合剂的HPLC指纹图谱研究 　　【摘 要】 目的：建立藿香正气合剂的HPLC指纹图谱。方法：样品直接进样，以橙皮苷为参照峰，通过紫外检测器（波长280nm）对藿香正气合剂进行HPLC指纹图谱分析。结果：对20批藿香正气合剂供试品进行检测，建立了该药品的HPLC指纹图谱并标示了15个共有指纹峰。各共有峰相对保留时间RSD均在100%以内。结论：该方法准确、重现性好，为藿香正气合剂的进一步质量标准化研究和控制提供依据 【关键词】 藿香正气合剂；指纹图谱；HPLC 【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）20-0043-05 藿香正气合剂由广藿香、紫苏叶、白芷、白术、陈皮、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、姜厚朴、姜半夏等13味药材组成，具有解表化湿、理气和中的功效，临床用于脾胃虚寒而外感风寒、胸膈闷满。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第7册中，原标准没有含量测定项[1]。为更好的控制该药品的质量，张志平等[2]采用薄层扫描法测定了藿香正气合剂中百秋李醇的含量；也有企业用高效液相色谱法测定橙皮苷含量作为其质控指标，但关于藿香正气合剂指纹图谱方面的研究未见报道。中药指纹图谱是一种实现对中药多组分，多指标分析的有效方法，该技术具有整体性、特征性、模糊性和稳定性的特征，可从整体上把握中药的质量[3]。从藿香正气类制剂指纹图谱研究的进展看[4-7]，藿香正气水的指纹图谱研究较多，但藿香正气水以挥发油类成分为主，而藿香正气合剂则以水溶性成分为主，因此其指纹图谱的研究思路和方法与藿香正气水截然不同。研究通过实验摸索，采用样品直接进样的方法对藿香正气合剂进行HPLC指纹图谱分析，并在方法学考察的基础上，建立了藿香正气合剂的指纹图谱，同时，以保留时间为指标，通过对比藿香正气合剂、药材样品提取液及缺某味药材阴性样品HPLC指纹图谱，对15个共有峰进行归属指认。该法具有操作简单、准确、重现性好等特点，为其质量控制提供了依据 1 仪器与试剂 11 仪器 Agilent1200型液相色谱仪（真空脱气装置、四元泵、自动进样器和DAD检测器、UWD紫外检测器）；MILLI-PROA纯水处理器 12 试剂 橙皮苷（批号：110721-201115，中国食品药品检定研究院）；藿香正气合剂20批（无糖型10批的批号：131215、131216、131217、131220、131221、131222、131224、131225、131226、131227，样品序号为S1～S10；有糖型10批，样品序号为S11～S20）、藿香正气合剂阴性样品13批（缺广藿香阴性、缺紫苏叶阴性、缺白芷阴性、缺白术阴性、缺陈皮阴性、缺茯苓阴性、缺桔梗阴性、缺甘草阴性、缺大腹皮阴性、缺厚朴阴性、缺半夏阴性、缺生姜阴性、缺大枣阴性）均由广西邦琪药业集团有限公司提供；单味药材提取液13批（广藿香提取液、紫苏叶提取液、白芷提取液、白术提取液、陈皮提取液、茯苓提取液、桔梗提取液、甘草提取液、大腹皮提取液、厚朴提取液、半夏提取液、生姜提取液、大枣提取液）按藿香正气合剂制法单独提取。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯 2 方法 21 色谱条件 色谱柱：CAPCELLPAK MGⅡ C18（46mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-01%磷酸溶液（B）梯度洗脱程序（见表1）；流速：10mL/min；检测波长：280nm；柱温：35℃；进样量：10μL。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于5000 22 供试品溶液的制备 取样品溶液过045μm微孔滤膜，即得 23 测定方法 精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定并记录液相色谱图，分析该色谱图60min内的色谱峰信息，20批样品均出现15个明显的液相色谱峰，将其确定为共有峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积 24 精密度实验 取藿香正气合剂，连续测定6次，以橙皮苷峰作为参照峰（S峰），考察各共有峰的相对保留时间（Tr=Ti/Ts）、相对峰面积（Ar=Ai/As）的一致性。结果表明：各共有峰相对保留时间RSD为004%～039%；相对峰面积RSD为056%～228% 25 稳定性实验 取藿香正气合剂，分别在0、8、16、24、32、40h检测，结果在40h内，各共有峰相对保留时间RSD为007%～113%，相对峰面积RSD为038%～228%，表明样品溶液打开包装后在40h内测定稳定 26 重复性实验 取藿香正气合剂6份，按“21”项实验条件分析，结果6份样品各共有峰相对保留时间RSD为002%～017%，相对峰面积的RSD为047%～200%。表明方法的重复性很好 27 耐用性实验 考察3个品牌色谱柱[