基于热阻梯度加热系统温度梯度芯片毛细管电泳用于DNA突变检测.pdfVIP

V01．31 高 等 学 校 化 学 学报 No．4 2010年4月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 667～671 基于热阻梯度加热系统的温度梯度芯片 毛细管电泳用于 DNA突变检测 徐章润 ，李 娜 ，张惠丹 ，樊晓峰 ，方 瑾 (1．东北大学分析科学研究中心 ，沈阳 110040 ；2．中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室， 医学细胞生物学教育部重点实验室，细胞生物学教研室，沈阳 110001) 摘要 建立了一种简单、可靠的空间温度梯度芯片毛细管电泳DNA突变分析系统 ，制作了热阻呈梯度均匀 变化的硅橡胶 (PDMS)基片，利用其热阻变化对热传导的影响，在基片表面形成稳定的空间温度梯度．通过 改变 PDMS基片的厚度差，可得到范围不同的温度梯度 ，且形成的温度梯度在 6h内保持稳定．利用该温度 梯度加热装置对玻璃微流控芯片进行加热，在 10℃温度梯度范围内对209bp的DNA突变标准样品进行分 离检测 ，单次样品分析时间为8．3min，并成功用于3例大肠癌患者石蜡组织切片中K—ras基因突变的检测． 关键词 微流控芯片；毛细管电泳；温度梯度；基因突变 中图分类号 0657．8 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2010)04-0667-05 单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphisms，SNPs)是一种最常见的人类可遗传变异，在人类 基因组 30亿对碱基 中，平均每 1000个碱基对 中就有一个 以上的SNPsl】J．SNPs筛选及其检测 已成为 后基因组时代研究者关注的热点，对SNPs和基因突变的检测在疾病预防、临床诊断和癌症研究等领 域均有广阔的应用前景 ．3．目前，已有多种SNPs和基因突变的检测方法，其中温度梯度毛细管电泳 (Temperaturegradientcapillaryelectrophoresis，TGCE)作为一种新的基因突变检测方法，具有分辨能力 高、操作简便且分析速度快等特点 J，可在 同一温度梯度下检测多个不同长度和不同突变的基因片 段，是 目前较为理想的突变检测方法之一．TGCE利用野生型与突变体基因所形成的同源双链和异源 双链在解链温度 (Tm)上存在的微小差异而进行分离，检测时以出现单峰为阴性和出现多峰为阳性作 为判定依据．TGCE的关键技术在于形成温度梯度 ，即时间温度梯度和空间温度梯度两种形式 ．时 间温度梯度是指在预先设定好的程序下通过加热器均匀改变芯片或毛细管温度，其控温设备简单，但 分离系统和加热系统之间存在时间上的滞后问题_6 ；空间温度梯度是指沿分离通道方向形成不随时 间改变的温度梯度 ，它无时间上的延迟，但温度控制系统复杂，采用的两套加热控温系统不利于整个 系统的集成化和 自动化控制[gJ．因此 ，建立一种结构简单、易于集成化且控温方便的温度梯度加热系 统是 TGCE检测基 因突变的研究重点． 由于芯片毛细管电泳具有分析速度快、分离效率高及试样和试剂消耗量少等优点，在生命科学等 研究领域具有广泛的应用前景 ¨ ”』．芯片式TGCE有望成为高效、高速检测基因突变和SNPs的有力 手段．Buch等_1在微流控芯片上实现了阵列通道DNA突变平行检测；Zhang等 应用一种简单的倾 斜式热辐射加热系统建立了稳定的空间温度梯度 ，用于K—ras基因突变检测．本文采用单一加热器并 利用PDMS的热阻变化对热传导的影响设计了一种结构简单、易于操作的空间温度梯度加热装置，在 此基础上，建立了微流控芯片TGCE分析系统，用于基因突变检测． 收稿 日期：2009—11—16． 基金项 目：国家 “九七三”计划项 目(批准号：2007CB714503)、国家 自然科学基金(批准号和辽宁省教育厅重点实验室 支持计划 (批准号资助． 联系人简介：徐章润，男，博士，副教授 ，主要从事微流控分析技术研究．E-mail：xuzr@mail．neu．edu．cn 方 瑾 ，女 ，博士 ，教授 ，主要从事肿瘤细胞生物学研究．E-mail：jfang61@netease．corn