第十章 复制.pptVIP

一、半保留复制是DNA复制的基本特征 半保留复制的的理论设想和实验依据 DNA半保留复制的证据 DNA半保留复制的证据 DNA半保留复制的证据 1958年M.Messelson and F.W.Stahl 将含14N--DNA(轻链）的细菌放在15N培养液中培养后得到15N--DNA(重链）细菌，提取轻链和重链DNA经密度梯度离心两种DNA处于离心管的不同位置；将15N-- DNA再放回14N--培养液中培养， DNA半保留复制的证据 提取子一代细菌DNA离心，DNA既不在重链DNA的位置也不在轻链DNA的位置，而是在中间位置；提取子二代细菌DNA离心出现了轻链和中间位置，第三代以后轻链带越来越宽，中间带保持不变。重密度带消失了。 一、半保留复制是DNA复制的基本特征 二、双向复制（主要） 原核生物复制时，DNA从起始点向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) ,包括复制起点和终点。 复制子是独立完成复制的功能单位。 真核生物的多复制子复制 真核细胞复制子小且复制速度慢 一、半保留复制是DNA复制的基本特征 二、DNA聚合酶催化核苷酸之间聚合 1. 反应原料：dNTP 2. 反应场所：细胞核 3. 反应条件： ⑴ 模板：亲代DNA双链打开同时作模板 ⑵ 引物：RNA片段 ⑶ 酶与蛋白因子 4. 反应规则 ⑴ 模板作用规则：Chagaff碱基配对原则 ⑵ 反应方向 5’→3’ 聚合反应的特点 DNA 新链生成需引物和模板； 新链的延长只可沿5? → 3?方向进行；。 严格遵守碱基配对原则 二、DNA聚合酶催化核苷酸之间聚合 核酸外切酶活性 聚合酶（polymerase）活性 可以催化脱氧核苷酸的聚合，但速度不快。 (10个核苷酸/S) 主要功能是填补随从链片断空隙。 表10-1 大肠杆菌中DNA聚合酶 PolⅠ PolⅡ PolⅢ 酶活性 5’ 3’聚合作用 ＋ ＋ ＋ 3’ 5’外切酶活性 ＋ - + 5’ 3’外切酶活性 ＋ - - 构成（亚基数） 单体 单体 多亚基 分子大小（×103） 109 90 900 体外链延长速度 （核苷酸数/分） 600 30 9000 分子数/细胞 400 ？ 10－20 功能 校读改错 不详 复制延长 去除引物、 填补空隙 二、DNA聚合酶催化核苷酸之间聚合 2. 核酸外切酶活性在复制中辨认切除错配碱基并加以校正 核酸外切酶(exonuclease)是指能从核酸链的末端把核苷酸依次水解出来的酶，外切酶是有方向性的。 DNA-pol的校读功能 3. 复制的保真性依赖正确的碱基选择 DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。 二、DNA聚合酶催化核苷酸之间聚合 四、与解链有关的酶和蛋白质因子 DNA分子的碱基埋在双螺旋内部，只有把DNA解成单链，它才能起模板作用。但无论是合成前、合成后，以及合成中的上下游DNA链，都是处于高度旋转、盘曲，高度压缩，并填塞满蛋白质的双股螺旋的超级结构状态。 。 Watson-Crick指出DNA复制最难、最复杂的是解开双螺旋。大肠杆菌复制的实验研究证明了他们的预见。参与模板制作的酶和蛋白因子远比参与复制的酶和蛋白因子多。 原核生物复制其始的相关蛋白质 (一) 解螺旋酶（ Dna