六、遗传与分子生物学实验准备.doc

实验一 二 果蝇的形态观察和两对性状的遗传分析 与唾液腺的提取 50人 实验前准备： 毛笔 30支 2袋纱布 4卷棉花 绳子 100只解剖针 剪刀30把 100个100ml的三角瓶 滤纸 量筒 烧杯 大烧杯 乙醚3瓶 70%酒精 3瓶 配10瓶各30ml的果蝇唾液腺染色液 分装10瓶50ml无菌水 分装10瓶50ml生理盐水 分装10瓶20ml 1N盐酸 配100瓶培养基 所需原料：琼脂100g 蔗糖1000g 玉米粉1000g 酵母粉100g 丙酸1瓶 蒸馏水 提前一周培养20瓶含大量幼虫的果蝇 实验三 染色体组型分析 50人 实验前准备： 剪刀 55把 胶水10瓶 人体染色体图纸50张 实验四 果蝇的三点测交 乙醚 酒精 毛笔 镊子 培养基 实验五 植物多倍体的诱发及鉴定 0.05%秋水仙素 150ml (eppondoff /0.5ml) 卡诺固定液（纯酒精3：1冰醋酸）400ml 1N 盐酸 200ml(eppondoff /1ml) 95%酒精 1L 70%酒精1L 3% 溶壁酶 50ml （可不需要，可用盐酸代替） 载玻片 盖玻片 解剖针 解剖镜 显微镜 醋酸洋红 配法 洋红 4-5g 冰醋酸 45ml 蒸馏水 55ml 将洋红粉加入水及醋酸中小火焰上加温，煮沸用玻棒搅和使其溶解。冷却后该液呈暗红色。过滤，为饱和干液密封保存，用时以90份蒸馏水稀释。 要提前2天买好3斤圆葱做预处理 另各买0.2元的黄豆和绿豆做预处理 一：培养根尖 20—25℃光照2—3天后剪下新长根尖1cm 二：预处理 0.05%秋水仙素 2—5h 三：卡洛固定液 1—24h 四：解离 1N HCL 60℃ 5′--20′ 五：后底渗 ddH2O 10′ 六：染色 醋酸洋红 5′后盖盖玻片 轻敲 七：镜检 实验六 细菌转导 培养皿 每人5个（1个LB培养基 3个EMB培养基 1个空的）提前一周灭菌 三角瓶（100ml）10个 提前一周灭菌 5ml离心管每人一个 1.5ml离心管 1ml 0.2ml 0.01ml枪头提前一周灭菌 涂布棒 接种环 培养箱 50人 配200ml半固体LB培养基（灭菌后分装到5ml的离心管中，每管3ml） 250加倍肉汤培养基 1L肉汤固体培养基 每人一块 EMB固体培养基 每人3块 共150块（3升） 磷酸缓冲液 1L 灭菌后分装10个小瓶中 以上培养基都需要灭菌 需要1瓶绿仿 试验七 转座子引起的插入突变 A ，B 培养基每人各两块 LB培养液每班两瓶，每瓶50ml （菌种培养好后分装到5ml的离心管中每组一只） 生理盐水 1L （0.75%） 1.5离心管灭菌两罐 少量5ml离心管 灭菌好各种枪头 A培养基 100×20 B培养基 250×8 水琼脂 1760ml 1760ml 10×A 200ml 200ml VB1 8ml 8ml MgSO4 8ml 8ml 糖 葡25%Glu 40ml 乳5%Lac 8ml 甘油 8ml Str 8ml 8ml Km 8ml 其中Str和Km要灭菌后冷却至55℃后加 注意B培养基Str和Km都要加 VB1 0.004g/1000ml Str 0.2g/1000ml Km 0.06g/1000ml MgSO4 0.246g/1000ml Glu 5g/1000ml Lac 0.2g/1000ml 甘油 0.2ml甘油/1000ml 实验8 真核细胞基因组提取 （50人25组 ） 试剂名称 浓度 数量 备注 液氮 纯 3开水瓶 临时打，保低温 抽提缓冲液（CTAB） (Tris-HCl 100mM pH8.0, EDTA 20mM, NaC