gst酶亲和层析及sdspage.pptVIP

工程菌中GST酶的亲和层析分离SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）鉴定 Contents 根据蛋白分子特异性的差异，如分子大小，溶解度，电荷等建立起来的。 性 质 方 法 分子大小 透析、超滤、密度梯度离心、凝胶过滤 溶解度 等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀 电荷 电泳、离子交换层析 吸附性质 吸附层析(羟基磷灰石层析、疏水作用层析) 对配体分子 亲和层析 的生物亲和力 蛋白质分离纯化 （1）盐析(Salting-out) 向蛋白质溶液中加入大量的中性盐[(NH4)2SO4，Na2SO4，NaCl 等]，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。常用的盐析剂是硫酸铵，其盐析能力强，水中溶解度大，浓度高时也不会引起蛋白质活性丧失。 盐析作用是由于当盐浓度较高时，盐离子与水分子作用，使水的活度降低，原来溶液中大部分的自由水转变为盐离子的水化水，从而降低蛋白质极性基团与水分子之间的作用，破坏蛋白质分子表面的水化层。 盐析沉淀的蛋白质仍保持天然构象，即仍有活性。 （2）透析(Dialysis) 蛋白质用盐析方法沉淀分离后，还需要脱盐才能进一步精提纯。脱盐常选用透析法或凝胶过滤。 （3）等电点沉淀 蛋白质是两性电解质，其溶解度与其净电荷数量有关，随溶液pH