氧化铝层析从云南红豆杉植物中转化提取紫杉醇.pdf

天然产物研究与开发 NATURALPRODUCTRESEARCHANDDEVELoF·MENT 氧化铝层析从云南红豆杉植物中 转化提取紫杉醇* 张志强苏志国 (中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室 北京 100080) 摘要采用氧化铝层析从云南红豆杉植物浸膏中转化生成和分离提纯了紫杉醇。考察 了氧化铝的类型、流动相中水和甲醇的添加、反应时间以及洗脱速度和洗脱剂组成等层 析操作条件对紫杉醇回收和分离的影响。研究表明，采用碱性氧化铝柱层析分离和回收 紫杉醇效果显著，通过对紫杉醇转化和分离条件的优化，经一步氧化铝柱层析，可以使紫 杉醇的含量从小于1．0％提高到大于27％，紫杉醇的回收率大予170％。 关键词氧化铝层析，紫杉醇，提纯 紫杉醇的工业生产主要面临两个方面的难题：一方面是紫杉醇资源问题，即紫杉醇资源匮 乏，红豆杉几乎是其唯一来源n矗]，寻找紫杉醇的资源是目前研究的一大热点；另一方面是紫杉 醇在原料中含量低且与其它在结构和极性等方面极为相似的紫杉烷物质共存，使分离提取困 难o]。尽管紫杉醇的化学全合成及半合成均已获得成功，但就临床供药而言，紫杉醇目前主要 还是依靠从红豆杉植物中提取Ⅲ。研究表明口]，紫杉醇除了以游离态存在于植物体中外，还常 常以结合态存在，如7一木糖紫杉醇、7一木糖基一10一去已酰紫杉醇等。此外，红豆杉植物中还存在 一些含紫杉醇核的紫杉醇类似物如7一表一紫杉醇、Ⅳ一去苯甲酰一Ⅳ一苯乙酰紫杉醇等。如果能将 它们转化为游离的紫杉醇，则可增加物料中紫杉醇的总量，缓解紫杉醇资源的短缺。 近年来，层析分离技术在植物天然产物提纯中显示出了巨大的潜力，并逐渐成为了高纯天 然产物制备的主要手段。层析具有分离效率高、操作简单、便于工业放大等特点，作为初分离手 段，层析的缺点是价格较昂贵。因此，为克服这一不足，就应选用价廉、性能优越的层析介质。同 时，考虑到分离原料往往是从植物体中直接浸泡出来的，其中色素、蜡质及其它杂质含量很高， 因此要求介质对物料的处理量大，而无机介质如氧化铝正具备这些优点。本文探索了应用氧化 铝层析，一步从云南红豆杉中分离提纯紫杉醇和使紫杉醇类似物转化为紫杉醇，取得了令人满 意的结果。 1 实验部分 1．1实验仪器与试剂 收稿日期：1999—08—16修回日期：1999—11-23 the ofChineseNational by Project NaturalScienceFund *国家自然科学基金重点项目资助(No(Supportedkey No 万方数据 天然产物研究与开发 溶剂(分析纯)，北京化工厂。 1．2实验方法 1．2．1氧化铝柱层析甲醇及三氯甲烷等溶剂用分子筛脱水，层析用氧化铝在190℃、l 托的真空下干燥6 rain，装成15／lqm×250 h，用三氯甲烷充分浸泡，超声波脱气5 mm的层析 柱。三氯甲烷清洗柱后进料，用三氯甲烷淋洗去未被吸附的杂质，然后采用不同浓度的甲醇／三 氯甲烷进行洗脱，收集洗脱出的紫杉醇峰，用旋转蒸发器在40～50℃蒸发，从所得固体物中取 样，HPLC测定其纯度。层析柱用100％的甲醇再生备用。 1．2．2紫杉醇样品的HPLC分析称取1～5mg紫杉醇样品，用甲醇溶解于5ml的容量 mm×250 瓶中，过滤。HPLC柱为4．6 v／v／v)j流速1．4ml／min，227 13133检测，以紫杉醇标准品为对照，外标法作定量分析。 2结果与讨论 2．1氧化铝的酸碱性对分离的影响 根据生产工艺的不同，层析用氧化铝可以有酸性、